目的：观察RNA干扰法沉默HPV18E6基因表达对宫颈癌Hela细胞牛长和凋亡的影响,探索宫颈癌基因治疗的新途径。方法：针对HPV18E6 mRNA序列合成一对60bp的编码siRNA的DNA模板和一对60bp的非特异性对照DNA模板,构建pSUPER—siRNA和pSUPER—com重组质粒,瞬时转染Hela细胞;采用RT—PCR法检测质粒转染后细胞HPV18E6基因表达的变化,用蛋白免疫印迹法检测转染后Hela细胞p53、p21、Bcl-

医学

20 08年 l 第 l 0月 6鲞笠

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囹论

著囹

.基础研究 .◆ . . .

H V 8 6基因沉默对宫颈癌 H l细胞生长和凋亡的影响 P 1E e a上官文学，杨业鹏，周梅，李五岭

sR Atreig o P I n ii h rwt fH l el a d id c sa o ts iN g t fH V E ihbt te go ho ea c l n n u e p po i a n 86 s s sSHANGGUAN e—x e,YANG W n u Ye— p n e g,ZHOU e,LIW u—ln M i ig

Dp r etfR dai dc e Sho o ai Mei l c ne, ei n e i, ei 0 0 3, hn . eat n a i o Mein, col B s dc i c P k gU i rt B i g10 8 C i m o tn i f c aSe s n v sy j n a

【 bt c O j t eT uyt fc f P 1E一tg i iN nt ot adaoti o H l A s at r】 b cv:o t e f to H V 6 a en s A o h g wh n pp s f e ei s d h ee s 8 r tg R er os ac l n oe p oe a n w t wa o e vc lc n e e t e a y . e ho el a d t x l r e pah y frc r ia a c rg neh r p s M t ds: p i fDNA e lt o n i A aro t mp ae c dig sRNA

a an tHP 8 6 a d i o t ltmp a ewee s nh s e o rc n t c S E— s g i s V1 E n t c n r e lt r y t e i d t e o sr tp UP R - i g o z u RNA a d p U E n S P R— c n rl o to p a mi s w ih w s t n f ce r n in l no Hea c l .T e HP 8 6 e p e so n Hea c l a ee td b l s d, h c a r se t d t s t i t l e l a a e y s h V1 E x r si n i l e l w s d tce y sRT— PCR. Th r ti x r s in o 5 p e p oe n e p e so fp 3, 21,Bc l一2 a d Ba sd tc e

y W e tr lt Th r lfr to n n x wa e e td b se n bo . e p oie ain a d

a o tss o l el wa ee td r s e t ey b elc u t g a d Ho c e t P u r s e tvtl ti i g Re u t: p p o i fHea c l sd tce e p ci l y c l o ni n e h s/ I oe c n i an n . s l s v n l f as sTh i e sRNA e p e so e tra an tH P 1 x r s in v co g is V 8E6 mRNA s s c s f l o tuce . T e ta se to fp wa uc e sul c nsr t d h r n fcin o SUPER— y

sRN ag t g HP 8 6 e e t ey d ce s d te e p e s n o V1 E n t e Hea c l n h e r a e r t i A tr ei V1 E f ci l e r a e h x rs i fHP 8 6 i h l el a d t e d c e s ae n v o swa r h n 7 s moe t a 0% i o ratrta fc in. I he Hea c l r n f ce wih pS ER— sRNA a mi n 48 h u f rnse to . n t l el ta se td t UP e s i pl s d,te h p o en e p e so f p r ti x r s in o 53, 21 n Ba wa nc e s d ini c nl wh l t e prs in f Bc p a d x s i ra e sg f a ty i ie he x e so o l一 2 Wa de r a e s ce d s

ma k d y r e l .Af rs e c f V1 E e e,t e p o i r t n o l el wa b iu l n i i d a d t e a o tt t i n e o e l HP 8 6 g n h r l e ai fHe a c l s o v o s i hb t n h p p oi f o s y e c r tswe esg i c n l n r a e .Co cu i n:HP 8 6一t rei g s ae r in f a t i c e s d i y nls o V1 E agt i n RNA c n s nfc n l n ii HP 8 6 e - a i i a t ih b t g

i y V1 E x p e so r s in,s p r s h g o h f Hea el n i d c a oo i. T e RNA n ef r g t c nq e a g t g o u p e s t e rwt o l c l a d n u e p tss s h it r i e h i u t ei f en r nHP 1 V 8E6 m a b a r vd w ahwa o he g n h r p fc r i a ac n ma . y e c n p o ie a ne p t y frt e e te a y o ev c lc i o . r

【 ywod eccl a io a N iH V 8 6 a ot i Ke r s rva cr nm;R A; P 1E;ppo s 1 c c sM d r n o g 0 8 1 ( 0:6 3—15 o en O cl y2 0,6 1 ) 1 5 o 66

【摘要 1目的： 观察 R A干扰法沉默 H V 8 6基因表达对宫颈癌 H l细胞生长和凋亡的影响， N P 1E ea探索宫颈癌基因治疗的新途径。方法：针对 H V 8 6m N P 1E R A序列合成一对 6 b 0 p的编码 s N的 D A模板和一对 6 b i A R N 0p的非特异性对照 D A模板， N构建 pU E S P R—s N i A和 p U E R S P R— cn重组质粒， o瞬时转染 H l e a细胞；采用 R T—

P R法检测质粒转染后细胞 H V 8 6基因表达的变化， C P 1E用蛋白免疫印迹法检测转染后 H l胞 p 3 p 1 e a细 5、2、

Bl 2和 Bx蛋白表达变化， c一 a以细胞计数法检测细胞生长情况， ocetP双荧光活细胞染色法检测细胞凋 H ehs I/亡。结果：S P R—s N pU E i A质粒转染能有效降低 HP 8 6在 m N水平的表达，染后 4 R V1E R A转 8小时，制效率 抑达 7%以上；染后细胞 p3 p 1和 B x蛋白表达显著增加， c一2蛋白表达减少。 R A干扰法沉默 0转 5、2 a Bl N

H V1E P 8 6基因表达后， e细胞增殖受到明显抑制， Hl a细胞凋亡率明显增加。结论：S P R—s N pU E i A质粒转染 R可有效抑制 H V 8 6在人宫颈癌 H l胞中的表达，制 H l P 1E e a细抑 e a细胞生长并促进其凋亡。以 H V 8 6为靶 P 1E

点的 R A干扰技术可望成为宫颈癌基因治疗的新途径

。 N

【关键词】宫颈癌；R A干扰； V 8 6凋亡 N HP 1E;【中图分类号】 70 3 R 3 .【文献标识码】 A【文章编号】6 2— 9 2一(0 8 1 6 3— 4 17 4 9 20 )0—15 0和泛素蛋白连接酶一起连接成三聚体复合物，复合物的形成导致 p 3的泛素化， 5随后被降解，致 O 3的半衰期由半小导 5时减少到不足 2 0分钟，而导致肿瘤的恶性增殖。R A从 N

宫颈癌是常见的妇科肿瘤之一，病率在女性恶性肿瘤发中居第二位…。现在已确认其主要致病原因是人乳头瘤病

毒，研究发现，人乳头瘤病毒 E 6蛋白可以通过 E 6结合 p 3 5【收稿日】期【回日期】修20 o 8—0—0 4 3 2o o 8—0—2 4 3

干扰 ( N i术是以 m N R A )技 R A为靶点，转录后使其沉默，在 不直接干扰 D A, N具有特异、高效、简便快捷和小干扰 R A( N s N )可在细胞间转移等特点 J i A R。本实验利用 R A N i技术，对 H V 8 6基因的 …… 此处隐藏：2512字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……