微生物学第四章 2015
发布时间:2021-06-07
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微生物学
微生物学 之 微生物的生长
微生物学
第 四 章 微 生 物 的 生 长
第一节
微生物的分离和纯培养第二节 微生物的生长繁殖
第三节微生物生长的环境因素
微生物学
第 四 章 微 生 物 的 生 长
微生物的分离和纯培养一、无菌技术
二、获得纯培养的方法 用固体培养基分离纯培养
用液体培养基分离纯培养单细胞(单孢子)分离
选择培养分离二元培养物
三、微生物的保藏技术
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第 四 章 微 生 物 的 生 长
无菌技术
在微生物研究及应用中,不仅需要 通过分离纯化技术从混杂天然微生 物群中分离出特定微生物,且还必 须随时注意保持微生物纯培养物的 “纯洁”,防止其他微生物的混入。
分离、转接及培养纯培养物时防止 被其他微生物污染的技术被称为无 菌技术,它是保证微生物学研究正 常进行的关键。
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第 四 章 微 生 物 的 生 长
微生物培养常用器具及灭菌 试管、玻璃烧瓶、平皿等是最为 常用的培养微生物的器具,在使 用前必须先行灭菌,使容器中不 含任何生物。
培养微生物的营养物质[称为培养 基(culture medium)]可以加到器皿 中后一起灭菌,也可在单独灭菌 后加到无菌的器具中。
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最常用的灭菌方法是高压蒸汽 灭菌,它可杀灭所有生物,包 括最耐热的某些微生物的休眠 体,同时可以基本保持培养基 的营养成分不被破坏。
有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。
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第 四 章 微 生 物 的 生 长
为防止杂菌,特别是空气中杂菌 污染,试管及玻璃烧瓶都需采用 适宜塞子塞口,通常采用棉花塞, 也可采用各种金属、塑料及硅胶 帽,它们只可让空气通过,而空 气中其他微生物不能通过。 平皿是由正反两平面板互扣而成, 这种器具是专为防止空气中微生 物污染而设计。
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接种操作 用接种环或接种针分离微生物,或在 无菌条件下把微生物由一个培养器皿 转接到另一个培养容器进行培养,是 微生物学研究中最常用的基本操作。 因打开器皿就可能引起器皿内部被环 境中的其他微生物污染,因此微生物 实验的所有操作均应在无菌条件下进 行:在火焰附近进行熟练无菌操作, 或在无菌箱或操作室内无菌的环境下 进行操作。
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纯培养:微生物学把从一个细胞或同一个细胞群繁殖得到的子代,称纯
培养或纯种。纯培养的类型: 菌种纯(菌落纯):是分离菌落而 得到的; 菌株纯(细胞纯):是分离单个细 胞得到的。
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用固体培养基分离纯培养 稀释倒平板法
涂布平板法 平板划线
分离法 稀释摇管法
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用固体培养基分离纯培养
不同微生物在特定培养基上形成的 菌落或菌苔一般都具稳定特征,可 成为对该微生物进行分类、鉴定的 重要依据。大多数细菌、酵母菌, 以及许多真菌和单细胞藻类能在固 体培养基上形成孤立菌落,采用适 宜的平板分离法很易得到纯培养。
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所谓(培养)平板,是指熔化
的固体培养基倒入无菌平皿, 冷却凝固后,盛有固体培养基 的平皿。 固体培养方法可将单个微生物
分离和固定在固体培养基表面
或里面。
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固体培养基,可使每个孤立活
微生物体生长、繁殖形成菌落, 形成的菌落便于移植。 最常用的分离、培养微生物的
固体培养基是琼脂固体培养基 平板。Koch建立的平板分离微 生物纯培养的技术简便易行, 100多年来一直是各种菌种分离 的最常用手段。
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稀释倒平板法待分离材料用无菌水作一系列稀释,取 不同稀释液少许,与熔化且冷却至50℃ 左右的琼脂培养基混合,摇匀后,倾入
灭过菌培养皿中,待琼脂凝固后,制成可能含菌平板,保温培养一定时间,可 能出现在平板表面的单个菌落,该菌落 可能是由一个菌体繁殖形成。随后挑取 该单个菌落,或重复以上操作数次,便
可得到纯培养。
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涂布平板法
在微生物学研究中更常用的纯种分 离方法是涂布平板法。其做法是先 将已熔化的培养基倒人无菌平皿, 制成无菌平板,冷却凝固后,将一 定量的某一稀释度的样品悬液滴加 在平板表面,再用无菌玻璃涂棒将 菌液均匀分散至整个平板表面,经 培养后挑取单个菌落。
微生物学
Pour plate
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Pour plate
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平板划线分离法
用接种环以无菌操作沾取少许待 分离的材料,在无菌平板表面进行 平行划线、扇形划线或其他形式连 续划线,微生物细胞数量将随着划 线次数增加而减少,并逐步分散开 来,如果划线适宜,微生物能一一 分散,经培养后,可在平板表面得 到单菌落。
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