实验三 扫描电子显微镜样品制备及观察

实验三

扫描电子显微镜样品制备及 其观察

College of Life Science and Technology, XINJIANG Univercity

一、实验目的听取电子显微镜的有关介绍，了解扫描电子显微镜 听取电子显微镜的有关介绍， 的基础知识。 的基础知识。 观摩扫描电镜生物样品制备技术演示， 观摩扫描电镜生物样品制备技术演示，了解对扫描 电子显微镜生物样品的基本要求、制备方法及过程。 电子显微镜生物样品的基本要求、制备方法及过程。 了解常规扫描电子显微镜样品制备过程及原理。 了解常规扫描电子显微镜样品制备过程及原理。

二、实验原理电子显微镜是以短波长的电子束为照明源， 电子显微镜是以短波长的电子束为照明源，用电 磁透镜成像，并与特定的机械装置、电子和高真空技 磁透镜成像，并与特定的机械装置、 术相结合所构成的现代化大型精密电子光学仪器。 术相结合所构成的现代化大型精密电子光学仪器。 扫描电子显微镜简称扫描电镜， 扫描电子显微镜简称扫描电镜，是用电视的 方式成像，用极狭窄的电子束去扫描样品， 方式成像，用极狭窄的电子束去扫描样品，即电子束 在样品上做光栅运动。 在样品上做光栅运动。电子束与样品作用将会产生各 种效应，其中主要是样品的二次电子发射， 种效应，其中主要是样品的二次电子发射，二次电子 能产生样品表面放大的性貌像，这个像是样品在扫描 能产生样品表面放大的性貌像， 时时序地建立起来的， 时时序地建立起来的，即使用逐点成像的方法获得放 大的像。 大的像。

(一)扫描电子显微镜的特点扫描电子显微镜特点是景深长，图像层次丰富， 扫描电子显微镜特点是景深长，图像层次丰富， 立体感强，为三维结构图像。样品制作简单， 立体感强，为三维结构图像。样品制作简单，不必做 超薄切片，且能观察大而后的样品， 超薄切片，且能观察大而后的样品，因此应用范围较 可以广泛应用于生物、 广，可以广泛应用于生物、非生物样品的表面及其断 面立体形貌的观察。 面立体形貌的观察。

(二)扫描电子显微镜的结构及作用

扫描电子显微镜主要由电子光学系统和显示单元 组成。 组成。 电子光学系统：电子光学系统由电子枪、 电子光学系统：电子光学系统由电子枪、几个磁透 扫描线圈以及样品室组成( 镜、扫描线圈以及样品室组成(实际上相当于透射 电镜的照明系统，它不需要成像系统)。 电镜的照明系统，它不需要成像系统)。 显示单元：显示单元包括信号的收集、放大、处理、 显示单元：显示单元包括信号的收集、放大、处理、 显示与记录(即照相)部分。 显

示与记录(即照相)部分。

(三)扫描电子显微镜的样品制备方法及过程1.扫描电子显微镜的样品制备方法 表面复型法：该法是用碳、 (1)表面复型法：该法是用碳、硅或火棉胶液的薄膜将标本 的表面拓印下来，再在透射电镜观察印在薄膜的精细结构。 的表面拓印下来，再在透射电镜观察印在薄膜的精细结构。 此法常用于观察细胞或组织的表面结构。 此法常用于观察细胞或组织的表面结构。 冰冻蚀刻法：此法是先将样品快速冻结， (2)冰冻蚀刻法：此法是先将样品快速冻结，然后在真空喷 镀仪中用冷刀切小削样品，使其暴露细胞的内部结构， 镀仪中用冷刀切小削样品，使其暴露细胞的内部结构，待切 面的冰在真空下升华后，表面喷镀铂碳膜，制成表面复型膜。 面的冰在真空下升华后，表面喷镀铂碳膜，制成表面复型膜。 从真空取出后，放在蒸馏水中剥离出复型膜， 从真空取出后，放在蒸馏水中剥离出复型膜，再置入浓硝酸 中将残留的样品溶解，经蒸馏水漂洗后打捞于铜网上， 中将残留的样品溶解，经蒸馏水漂洗后打捞于铜网上，待干 后于电镜下观察。此法常用于观察细胞内部结构， 后于电镜下观察。此法常用于观察细胞内部结构，得到的为 生动的立体浮雕图像。 生动的立体浮雕图像。

2.扫描电子显微镜的样品制备过程 由于观察目的不同， 由于观察目的不同，除了使用相同的固定液 外，扫描电子显微镜生物样品制备与透电子显微镜 射有较大的差异。为了得到无损、 射有较大的差异。为了得到无损、真实而清晰的表 面形貌结构， 面形貌结构，在扫描电子显微镜样品制备的全过程 中都必须十分小心地保护被观察面， 中都必须十分小心地保护被观察面，因此在二次电 子表面形貌成像工作状态下， 子表面形貌成像工作状态下，必须满足下述四项基 本要求： 本要求： 样品的被观察面应充分的暴露出来( ①样品的被观察面应充分的暴露出来(在所 要求的二次电子图像分辨率水平上),无污染、 ),无污染 要求的二次电子图像分辨率水平上),无污染、无 皱缩、无明显的人工损伤及附加结构。 皱缩、无明显的人工损伤及附加结构。

②镀一层均匀的重金属导电材料(金、铂、钯铱和金等), 镀一层均匀的重金属导电材料( 钯铱和金等), 造成被观察表面的“质量—密度 一致性。 厚度” 密度” 造成被观察表面的“质量 密度”一致性。“厚度”即要大 于等于入射点子束进入样品的扩散深度， 于等于入射点子束进入样品的扩散深度，又不能掩盖样品本 身的凹凸形貌结构。同时，样品表面的二次电子发射率要高

。 身的凹凸 …… 此处隐藏：2971字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……