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普通光学显微镜原理及其使用

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显微镜的光学系统1. 2. 放大微小的物体或微细的结构，形成倒立实像 把像投射到目镜光阑处

光学系统

物镜 目镜 聚光器 光阑

1. 2.3.

放大物镜映来的已放大的倒立实像 校正物镜余留下来的像差将物像投射到一定的位置上，便于放映或照相

使来自光源的光线放大，聚成光束，透过载片 照明样品，射入物镜

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显微镜的光学系统---物镜 物镜显微镜的质量主要取决于物镜。价格昂贵

物镜的种类 物镜与盖片之间不加任何液体 4 ,10 根据前透 镜与盖玻 片之间介 质的不同 1. 2. 3. 干燥系物镜 水浸系物镜 油浸系物镜 ，20 ,40

水浸物镜刻有“W”或“Water”字样 水浸两用物镜刻有“Oil+w”字样 油浸物镜刻有“oil 或oel或 imm”和“HI” 字样 甘油浸物镜刻有“Glyc” 或 Glyz”字样小技巧

香柏油致癌， 香柏油致癌，且易 凝结，原则上不用！ 凝结，原则上不用！

使用油镜时要将聚光镜提升到 最高点，并放大虹彩光阑， 最高点，并放大虹彩光阑，否则会降低 数值孔径而影响分辨率

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显微镜的光学系统---物镜 物镜 物镜的种类1. 根据像 差的矫 正程度 2. 3. 4. 5. 消色差物镜 复消色差物镜 萤石物镜 平场物镜 特种物镜 特殊光学玻璃制成；纠正了纠正了红、黄、蓝 三种色光的色差，使之聚焦于一点 外表面常刻有“APO”字样 ；质量优良 最佳清晰范围400-720nm,容纳了全部可见光谱

最常见；将光谱中红光和蓝光聚焦于一点，黄 绿光聚焦于另一点 外表面常刻有“Ach”字样 最佳清晰范围510-630nm

又叫“半消色差物镜”,透镜多由萤石透镜取代 色差校正介于消色差物镜与复消色差物镜最佳清晰范围430-680nm,容纳了绝大部分可见光谱

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显微镜的光学系统---物镜 物镜 物镜的种类1. 根据像 差的矫 正程度 2. 3. 4. 5. 消色差物镜 复消色差物镜 萤石物镜 平场物镜 特种物镜 除其他物镜优点外，还校正了场曲 在相等的放大率下，所成影像要比一般物镜的 影像为大 “PL” ”PLAN”平场消色差物镜；”PL·FL”平场 萤石物镜；;”PL·APO”平场复消色差物镜， 最佳； “S PLAN”超平场消色差物镜；“S PLAN APO”超平场复消色差物镜 1、2、3种物镜都残留程度不 同的场曲，使得视场内不同部分 的影象，不能同时准焦

相差物镜(在物镜的后焦平面出装有一块相板) 带校正环物镜 带虹彩光阑物镜 无应变物镜(刻有“PO”或“POL”字样) 无荧光物镜(刻有“UVFL”标志) 无盖片物镜 长工作距离物镜

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显微镜的光学系统---物镜 物镜 物镜壳上的标志 常和放大倍数写在一

起，如10/0. 25,40/0.65 1. 2. 3. 4. 5. 物镜的种类 放大倍数 数值孔径 标准机械筒长 需用盖片情况 主要两种标准：160mm和170mm 160mm 170mm 指从镜筒的目镜管上缘至物镜螺旋肩的距离 ∞表示机械筒长为无限大 凡需加用盖玻片的物镜，在外壳上刻有需盖玻片的厚 度，如0.17。刻值常与机械筒长写在一起，如160/0. 17 160/0或160/: 绝对不用盖玻片！ 160/— 盖片有无皆可 ∞/0或∞/—

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显微镜的光学系统---目镜 目镜 目镜实际上是一个放大镜，显微镜的分辨 率是有物镜的数值孔径决定的。 结构简单，由两片(组)正透镜组成，上 面的透镜叫接目镜，下端的透镜叫场镜

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显微镜的光学系统---目镜 目镜 目镜的分类 应用最多，但视场数较小 1. 2. 3. 4. 5. 惠更斯目镜 兰姆斯登目镜 补偿目镜 平场目镜 摄影目镜 接目镜和场镜均由平凸单透镜组成，凸面都朝下 视场光圈位于两透镜之间，使用时应与消色差物镜配 合，可以对消色差物镜的放大率色差起到校正作用 由两片凸面相对的平凸透镜组成 目镜光阑位于场镜下方 眼透镜和场镜都用几片透镜粘合而成，专为与复消色 差物镜配合使用设计的 标有“ compens, komp, C ,K 等字样 接目镜在惠更斯目镜的基础上增加了一块负透镜，故 能较好地校正像场弯曲，使视场平坦 标有“PLAN”,”P”字样，一般与平场物镜配合使用

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显微镜的光学系统---聚光器 聚光器 又叫聚光镜，由透镜与孔径光阑组成 由两片透镜组成；NA值在1.2~1.25之间 聚光器种类： 1. 2. 明视野聚光器 专用聚光器 阿贝聚光器 消色差等光程聚光器 旋出式聚光器 超低倍聚光器 由一系列透镜组成(5~7片);NA可达1.4 对球差、色差和彗型像差的校正能力很强， 质量最高 有较好聚光能力，但在数值孔径高于 0.60时，色差及球差均会表现出来

用于低倍物镜，40倍以下的物镜

暗视野聚光器 相位差聚光器 微分干涉差聚光器 极低倍使用，1倍或2倍

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显微镜的照明装置 透射式照明 照明光束的中轴与 显微镜的光轴同处 在一直线上 1. 2. 中心照明 斜射照明 照明光束的中轴与 显微镜的光轴不在 一直线上 2.1. 2. 明场斜射照明(用于相差显微镜) 暗场斜射照明(用于暗视野显微镜)1. 2. 临界照明(不适合显微照相) 柯勒照明(最为理想)

1.

柯勒照明调节步骤： 选取10 物镜，在标本出聚焦， 开足孔径光阑(聚光器处),缩 小视场光阑(在显微镜的底座处) 上下调节聚光器使视场光圈成像 利用调中旋钮将光阑调中慢慢开 大光阑直到与视场边缘相切 选适当倍数的物镜，根据所用物

镜的数值孔径并依据具体要求在 60%-80%之间调节孔径光阑 观察，摄影

3. 4.

落射式照明

5.

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