普通光学显微镜原理及其使用

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普通光学显微镜原理及其使用

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显微镜的光学系统1. 2. 放大微小的物体或微细的结构，形成倒立实像 把像投射到目镜光阑处

光学系统

物镜 目镜 聚光器 光阑

1. 2.3.

放大物镜映来的已放大的倒立实像 校正物镜余留下来的像差将物像投射到一定的位置上，便于放映或照相

使来自光源的光线放大，聚成光束，透过载片 照明样品，射入物镜

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显微镜的光学系统---物镜 物镜显微镜的质量主要取决于物镜。价格昂贵

物镜的种类 物镜与盖片之间不加任何液体 4 ,10 根据前透 镜与盖玻 片之间介 质的不同 1. 2. 3. 干燥系物镜 水浸系物镜 油浸系物镜 ，20 ,40

水浸物镜刻有“W”或“Water”字样 水浸两用物镜刻有“Oil+w”字样 油浸物镜刻有“oil 或oel或 imm”和“HI” 字样 甘油浸物镜刻有“Glyc” 或 Glyz”字样小技巧

香柏油致癌， 香柏油致癌，且易 凝结，原则上不用！ 凝结，原则上不用！

使用油镜时要将聚光镜提升到 最高点，并放大虹彩光阑， 最高点，并放大虹彩光阑，否则会降低 数值孔径而影响分辨率

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显微镜的光学系统---物镜 物镜 物镜的种类1. 根据像 差的矫 正程度 2. 3. 4. 5. 消色差物镜 复消色差物镜 萤石物镜 平场物镜 特种物镜 特殊光学玻璃制成；纠正了纠正了红、黄、蓝 三种色光的色差，使之聚焦于一点 外表面常刻有“APO”字样 ；质量优良 最佳清晰范围400-720nm,容纳了全部可见光谱

最常见；将光谱中红光和蓝光聚焦于一点，黄 绿光聚焦于另一点 外表面常刻有“Ach”字样 最佳清晰范围510-630nm

又叫“半消色差物镜”,透镜多由萤石透镜取代 色差校正介于消色差物镜与复消色差物镜最佳清晰范围430-680nm,容纳了绝大部分可见光谱

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显微镜的光学系统---物镜 物镜 物镜的种类1. 根据像 差的矫 正程度 2. 3. 4. 5. 消色差物镜 复消色差物镜 萤石物镜 平场物镜 特种物镜 除其他物镜优点外，还校正了场曲 在相等的放大率下，所成影像要比一般物镜的 影像为大 “PL” ”PLAN”平场消色差物镜；”PL·FL”平场 萤石物镜；;”PL·APO”平场复消色差物镜， 最佳； “S PLAN”超平场消色差物镜；“S PLAN APO”超平场复消色差物镜 1、2、3种物镜都残留程度不 同的场曲，使得视场内不同部分 的影象，不能同时准焦

相差物镜(在物镜的后焦平面出装有一块相板) 带校正环物镜 带虹彩光阑物镜 无应变物镜(刻有“PO”或“POL”字样) 无荧光物镜(刻有“UVFL”标志) 无盖片物镜 长工作距离物镜

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显微镜的光学系统---物镜 物镜 物镜壳上的标志 常和放大倍数写在一

起，如10/0. 25,40/0.65 1. 2. 3. 4. 5. 物镜的种类 放大倍数 数值孔径 标准机械筒长 需用盖片情况 主要两种标准：160mm和170mm 160mm 170mm 指从镜筒的目镜管上缘至物镜螺旋肩的距离 ∞表示机械筒长为无限大 凡需加用盖玻片的物镜，在外壳上刻有需盖玻片的厚 度，如0.17。刻值常与机械筒长写在一起，如160/0. 17 160/0或160/: 绝对不用盖玻片！ 160/— 盖片有无皆可 ∞/0或∞/—

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显微镜的光学系统---目镜 目镜 目镜实际上是一个放大镜，显微镜的分辨 率是有物镜的数值孔径决定的。 结构简单，由两片(组)正透镜组成，上 面的透镜叫接目镜，下端的透镜叫场镜

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显微镜的光学系统---目镜 目镜 目镜的分类 应用最多，但视场数较小 1. 2. 3. 4. 5. 惠更斯目镜 兰姆斯登目镜 补偿目镜 平场目镜 摄影目镜 接目镜和场镜均由平凸单透镜组成，凸面都朝下 视场光圈位于两透镜之间，使用时应与消色差物镜配 合，可以对消色差物镜的放大率色差起到校正作用 由两片凸面相对的平凸透镜组成 目镜光阑位于场镜下方 眼透镜和场镜都用几片透镜粘合而成，专为与复消色 差物镜配合使用设计的 标有“ compens, komp, C ,K 等字样 接目镜在惠更斯目镜的基础上增加了一块负透镜，故 能较好地校正像场弯曲，使视场平坦 标有“PLAN”,”P”字样，一般与平场物镜配合使用

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显微镜的光学系统---聚光器 聚光器 又叫聚光镜，由透镜与孔径光阑组成 由两片透镜组成；NA值在1.2~1.25之间 聚光器种类： 1. 2. 明视野聚光器 专用聚光器 阿贝聚光器 消色差等光程聚光器 旋出式聚光器 超低倍聚光器 由一系列透镜组成(5~7片);NA可达1.4 对球差、色差和彗型像差的校正能力很强， 质量最高 有较好聚光能力，但在数值孔径高于 0.60时，色差及球差均会表现出来

用于低倍物镜，40倍以下的物镜

暗视野聚光器 相位差聚光器 微分干涉差聚光器 极低倍使用，1倍或2倍

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显微镜的照明装置 透射式照明 照明光束的中轴与 显微镜的光轴同处 在一直线上 1. 2. 中心照明 斜射照明 照明光束的中轴与 显微镜的光轴不在 一直线上 2.1. 2. 明场斜射照明(用于相差显微镜) 暗场斜射照明(用于暗视野显微镜)1. 2. 临界照明(不适