荧光分析法在生物领域应用(2)
发布时间:2021-06-06
发布时间:2021-06-06
分析法的应用更加广泛,发展了各类荧光分析方法,如对不发荧光的物质可通过某类化学反应使其转变为适合测定的荧光物质,近年来,还发展了各种新型荧光分析技术,如激光诱导荧光法,同步荧光法等,这些技术的应用加速了各种新型荧光分析仪器的研制,使荧光分析不断朝着高效、痕量、微观和自动化方向发展。
2.荧光分析法的基本原理
2.1.荧光产生的机理
2.1.1分子的激发态—单重激发态和三重激发态
电子激发态的多重度:M=2s+1 (S为电子自旋量子数的代数和)
基态单重态:M=2s+1=1
激发单重态:M=2s+1=1
激发三重态:M=2s+1=3[1]
2.1.2分子的去活化过程
处于激发态的分子是不稳定的, 它可能通过辐射跃迁或非辐射跃迁等去活化过程返回基态,其中以速率最快、激发态寿命最短的途径占优势。
2.2激发光谱和发射光谱
任何荧光分子都具有两种特征的光谱,既激发光谱和发射光谱。荧光的激发光谱和发射光谱是荧光物质的基本特征,他们是荧光定性和定量分析的基本参数和依据。
荧光光谱的特征:a.斯托克斯(Stokes)位移,b. 镜像规则,c.发射光谱的形状与激发波长无关
3.荧光分析法的注意事项
3.1荧光的减退
荧光物质经紫外线长时间照射及空气的氧化作用,会使荧光逐渐减退。
3.2试剂的浓度
有些试剂能吸收紫外线,有颜色的试剂还有吸收荧光的作用,因此分析时所加试剂的量不可太多。
3.3 pH的影响
上一篇:南北朝民歌
下一篇:小学英语学习习惯的培养