安徽中医学院学报第２９卷第５期２０１０年１０月ＪＯＵＲＮＡＬＯＦ

ＡＮＨＵＩＴＣＭ（５（）Ｉ．ＬＥＧＥＶ０１．２９Ｎｏ．５（）嚏２０１０４７

１３防御素在肺气虚证大鼠发病中的作用

程惠娟，汪长中，官

妍，王

艳，俞丽华

（安徽中医学院中西医结合临床学院，安徽合肥２３００３８）

［摘要］目的观察肺气虚证大鼠血清ｐ防御素和支气管灌洗液、肺匀浆ｐ：防御素水平的变化，研究ｐ防御素在肺气虚证大鼠发病中的作用。方法采用呼吸道生物被膜茵（铜绿假单胞茵）滴鼻法引起大鼠呼吸道慢性感染，辅以寒冷、疲劳刺激，诱导肺气虚证的发生。分别在大鼠感染后３，３０，１００ｄ观察肺组织病理学变化，酶联免疫吸附试验测定其血清８防御素，气管冲洗液、肺匀浆Ｂ。防御素水平。结果模型组大鼠在感染

后３ｄ，肺部急性感染明显，血清ｐ防御素、肺匀浆Ｂ：防御素水平显著升高；感染３０，１００ｄ时大鼠肺部显示慢

性感染，血清ｐ防御素和气管灌洗液、肺匀浆Ｂ。防御素水平显著降低（Ｐ＜０．０１）。结论气虚证的发病过程，发病急性期参与炎症反应，慢性期诱发或加重肺气虚证。［关键词］肺气虚证；８防御素；细茵生物膜；铜绿假单胞茵

［中图分类号］Ｒ２４１．６［文献标志码］Ａ［ＤＯＩ］ＩＯ．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－２２１９．２０１０．０５．０１７

肺气虚证是以肺功能减退为主要特征的全身多系统、多脏器功能衰退综合征，是老年人死亡的第一位病因。为了更一瓮面地探明肺气虚发病的本质，笔者采用呼吸道生毛，被膜菌（铜绿假单胞菌）滴鼻法，辅以寒冷疲劳刺激引起大鼠呼吸道慢性感染，复制肺气虚证模型［１］，测定大鼠血清Ｂ防御素和气管、肺匀浆Ｇｚ防御素的动态变化，观察肺组织的病理学改变，研究８防御素在肺气虚证大鼠发病中的作用，及其与肺气虚证候的相关性。

１

Ｂ防御素参与了肺

文献［１］检测铜绿假单胞菌生物膜，扫描电镜确认（图１）。阴性对照组大鼠正常饲养，模型组大鼠以

１．６ＬＤ５０（约３．８×ｉ０９

ｃｆｕ／ｍ１）菌量浓缩至０．２

ｍｌ，

然后一次性滴鼻感染。滴鼻当天开始。隔天置入直径５０ｅｍ，高１００ｃｍ，水深４０ａｍ的桶内游泳１次，水温控制在９℃左右，游泳时间以大鼠头开始沉入水中为限，捞出大鼠后不予保温和擦干，每重复３次休息ｌ周，再继续上法刺激，直至动物处死［１］。

材料

１．１菌株铜绿假单胞菌从安徽中医学院附属医院呼吸道患者标本中分离得到并经本课题组鉴定。１．２实验动物

健康ＳＤ大鼠，６个月龄，雌雄随

机，体质量（２５０士１０）ｇ，由江苏省动物实验中心提供。实验动物生产许可证：ＳＣＸＫ（苏）２００２－０００２。动物正常饲养１周后，随机被分为阴性对照组和模型组，每组３０只，两组再被分成３，３０，１００测，每组１０只大鼠。１．３仪器和试剂

３１８一酶标仪：上海三科仪器有限

公司；９６孔平板：杭州生友生物技术有限公司；扫描电镜Ｓｉｒｉｏｎ２００：ＦＥＩ公司；血清Ｄ防御素酶联免疫吸附试验（ｅｎｚｙｍｅ

ｌｉｎｋｅｄ

ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ

ａｓｓａｙ，

ｄ

３个亚

图１扫描电镜下铜绿假单胞面生物膜（×２００００）

组，分别在感染后３，３０，１００ｄ处死以进行相关检

２．２模型复制后每天观察大鼠发病情况于感染

后３，３０，１００ｄ各组随机取１０只大鼠，腹主动脉取血后处死，无菌操作取出气管和肺，取右肺中叶相同部位肺组织１块，置１０％甲醛中固定２４ｈ，乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋切片，苏木精一伊红染色，光镜下观察肺组织变化。余肺按１ｍｌ／ｇ加９．０ｇ／Ｌ氯化钠注射液（ｎｏｒｍａｌＮＳ）制备肺匀浆，经１

５００

ｓａｌｉｎｅ，

ＥＬＩＳＡ）试剂盒：美国ＡＤＬ公司；ｐ２防御素ＥＬＩＳＡ试剂盒：美国Ｒ＆Ｄ公司。

２

ｒ／ｍｉｎ离心后取上清

方法

液。按１ｍｌ／ｇ加ＮＳ冲洗气管３次，获气管冲洗

按

液。按ＥＬＩＳＡ试剂盒说明书测定血清０防御素，气管冲洗液、肺匀浆Ｂ：防御素。

２．３统计学方法应用ＳＰＳＳ１１．０软件进行统计

学分析。连续型变量用“均数士标准差（芽士５）”表

２．１铜绿假单胞菌生物膜的鉴定及模型复制

基金项目：安徽省年度重点科研项目（０７０２１００３）作者简介：程惠娟（１９５３一），女，副教授，硕士研究生导师