中国慢性病预防与控制２００８年２月第１６卷第１期ＣｈｉｎＪＰｒｅｖＣｏｎｔｒＣｈｒｏｎＮｏｎ－ｃｏｍｍｕｎＤｉｓ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ２００８，Ｖｏｌ．１６，Ｎｏ．１

２３

【论著】

文章编号：１００４－６１９４（２００８）０１－００２３－０４

负载肺癌Ａ５４９抗原的树突状细胞对细胞因子诱导的

杀伤细胞特异性激活研究

苏征１，张灏１，李欣２，汤华２

摘要：目的

观察负载肺癌Ａ５４９抗原的树突状细胞（ＤＣ）对细胞因子诱导的杀伤细胞（ＣＩＫ）特异性肿瘤杀伤活性的作用。

方法由正常人富含淋巴细胞白膜分离、细胞因子诱导制备ＤＣ细胞和ＣＩＫ细胞。用流式细胞术分析ＤＣ细胞和ＣＩＫ细胞的表型。经混合淋巴反应和体外细胞毒性实验观察负载Ａ５４９抗原的ＤＣ对ＣＩＫ具有特异性激活作用。结果表型分析显示，

ＣＩＫ细胞以ＣＤ３＋ＣＤ５６＋自然杀伤细胞为主，成熟ＤＣ细胞高表达ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６和ＨＬＡ－ＤＲ，并可刺激ＣＩＫ细胞的增殖诱

导混合淋巴反应，而负载Ａ５４９抗原的ＤＣ细胞能显著增强ＣＩＫ细胞特异性杀伤靶细胞的能力（Ｐ＜０．０５）。小鼠注射ＣＩＫ、 ＤＣ （７０．１７±ＣＩＫ和ＡｇＤＣＣＩＫ后的肿瘤直径分别为（６５．３４±１２．３３）、１３．２６）和（３６．７９±９．１９）ｍｍ，后者的抗肿瘤作用较高（Ｐ＜０．０５）。结论抗原负载的ＤＣ细胞可活化ＣＩＫ细胞，并使其具有特异性杀伤肿瘤细胞的能力。

关键词：树突状细胞；细胞因子诱导的杀伤细胞；激活中图分类号：Ｒ７３

文献标识码：Ａ

Ｃｙｔｏｋｉｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄＫｉｌｌｅｒＣｅｌｌＡｃｔｉｖａｔｉｏｎｂｙＤｅｎｔｒｉｔｉｃＣｅｌｌｓＬｏａｄｅｄｗｉｔｈｔｈｅＴｕｍｏｒＡｎｔｉｇｅｎｆｒｏｍＨｕｍａｎＬｕｎｇＣａｎｃｅｒＣｅｌｌＬｉｎｅＡ５４９Ｔｉａｎｊｉｎ３０００７０，Ｃｈｉｎａ

Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒｅｆｆｅｃｔｏｆｃｙｔｏｋｉｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌ（ＣＩＫ）ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｂｙｄｅｎｔｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓ

ＳＵＺｈｅｎｇ，ＺＨＡＮＧＨａｏ，ＬＩＸｉｎ，ｅｔａｌ．ＴｈｅＢａｓｉｃＭｅｄｉｃｉｎｅＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ；ＴｉａｎｊｉｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，

（ＤＣ）ｌｏａｄｅｄｗｉｔｈｔｈｅｔｕｍｏｒａｎｔｉｇｅｎｆｒｏｍｈｕｍａｎｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＡ５４９．ＭｅｔｈｏｄｓＣＩＫｓａｎｄＤＣｓｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍｔｈｅｈｅａｌｔｈｄｏｎｏｒ＇ｓｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｃｙｔｅ（ＰＢＭＣ）ｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｉｎｄｕｃｅｄｂｙｔｈｅｃｙｔｏｋｉｎｅｉｎｖｉｔｒｏ．ＤＣｓｗｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄｂｙｃｕｌｔｕｒｅｏｆａｄ－ｈｅｒｅｎｔｃｅｌｌｓｆｒｏｍＰＢＭＣｆｏｒ７ｄａｙｓｉｎｔｈｅｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆＩＬ－４ａｎｄＧＭ－ＣＳＦ．ＣＩＫｓｗｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄｂｙｃｕｌｔｕｒｅｏｆｎｏｎ－ａｄｈｅｒｅｎｔｃｅｌｌｓｆｏｒ７ｏｒ１４ｄａｙｓｉｎｔｈｅｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆＩＮＦ－γ，ＩＬ－２，ＩＬ－１α，ａｎｄｍｏｕｓｅａｎｔｉ－ｈｕｍａｎＣＤ３ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ．ＴｈｅｐｈｅｎｏｔｙｐｅｏｆＤＣａｎｄＣＩＫｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙＦＣＭ．ＴｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＤＣｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙＭＬＲ；ａｎｄｔｈｅｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆＣＩＫｗａｓａｓｓａｙｅｄｂｙＭＴＴ．ＴｈｅＣＩＫｅｘｐｒｅｓ－ｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｅｏｆｃｙｔｏｋｉｎｅａｎｄｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｇｅｎｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｔｈｅＤＮＡｍｉｃｒｏ－ａｒｒａｙｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｃｅｓ．ＲｅｓｕｌｔｓＰｈｅｎｏｔｙｐｉｃａｎａｌｙｓｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔＣＤ３＋ＣＤ５６＋ＮＫＴｃｅｌｌｓｗｅｒｅｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔｉｎｔｈｅＣＩＫｃｅｌｌｓｇｅｎｅｒａｔｅｄｉｎｔｈｅｃｕｒｒｅｎｔｓｔｕｄｙ，ａｎｄｔｈａｔＤＣｃｅｌｌｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｈｉｇｈｌｅｖｅｌｓｏｆＣＤ４０，ＣＤ８０，ＣＤ８６ａｎｄＨＬＡ－ＤＲ．ＡｓｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｂｙＭＴＴａｓｓａｙ，ｔｈｅＣＩＫｃｅｌｌｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅｄｒａｐｉｄｌｙ，ａｎｄｔｈｅＤＣｃｅｌｌｓｗｅｒｅａｂｌｅｔｏｉｎｄｕｃｅａｎＭＬＲ．Ｂｏｔｈａｎｔｉｇｅｎ－ｐｕｌｓｅｄａｎｄｕｎｐｕｌｓｅｄＤＣｓｔｉｍｕｌａｔｅｄｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＣＩＫｃｅｌｌｓ，ａｎｄｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｗａｓｆｏｕｎｄｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｗｏｋｉｎｄｓｏｆＤＣｃｅｌｌｓ．ＵｎｐｕｌｓｅｄＤＣｃｅｌｌｓｄｉｄｎｏｔｅｎｈａｎｃｅｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｍｅ－ｄｉａｔｅｄｂｙＣＩＫｃｅｌｌｓｅｖｅｎｔｈｏｕｇｈｔｈｅｙｗｅｒｅａｂｌｅｔｏｓｔｉｍｕｌａｔｅＣＩＫｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．Ａｎｔｉｇｅｎ－ｐｕｌｓｅｄＤＣ，ｈｏｗｅｖｅｒ，ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄＣＩＫｃｅｌｌｓｔｏｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙｋｉｌｌｔａｒｇｅｔｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉｔｕｍｏｒｅｆｆｅｃｔｗａｓａｌｓｏｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎｎｕｄｅｍｉｃｅｂｅａｒｉｎｇｔｕｍｏｒｓ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＯｎｅｏｆｔｈｅｍａｊｏｒｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｎｔｉｇｅｎ－ｐｕｌｓｅｄＤＣｉｓｔｏａｃｔｉｖａｔｅＣＩＫｃｅｌｌｓａｎｄｔｏｍａｋｅｔｈｅｍｓｐｅｃｉｆｉｃｉｎｋｉｌｌｉｎｇｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓ；Ｃｙｔｏｋｉｎｅｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｓ；Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ

肺癌是世界范围内最常见的癌症，其发病率与死亡率之比约为１．０８：１，是癌症死亡的主要原因之一。免疫活性细胞注射的过继治疗是肿瘤生物治疗研究的热点之一。其中负载肿瘤相关抗原的树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓ，ＤＣ）对细胞因子诱导的杀伤细胞

基金项目：天津市重点攻关项目资助（０２３１１１５１１－８，０３３１８１９８８）作者单位：１．天津医科大学基础医学院实验中心，天津医科大学生命科学中心，天津

（ｃｙｔｏｋｉｎｅｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｓ，ＣＩＫ）由于增殖更快、杀伤活性更强，因而具有广泛的应用前景。然而国内外有关共培养ＤＣ－ＣＩＫ的报道主要集中在对白血病的研究中，对其他细胞的研究较少，实验中的靶细胞又多采用自体肿瘤细胞，研究内容也停留在共培养细胞的杀伤活性上，对其机制的研究不足〔１，２〕。此外，相关体内及临床研究开展的较少，局限了共培养ＤＣ－ＣＩＫ的应用范围。因此，笔者进行了ＤＣ激活的ＣＩＫ细胞杀伤活性分析。本研究不仅可促进ＣＩＫ细胞激活机制的研究，而且对ＤＣ细胞和ＣＩＫ细胞的应用研究也具有推动作用。

３０００７０；２．天津

３０００７０

作者简介：苏征（１９７０－），女，天津市人，主管技师，硕士，从事细胞免疫学研究。

通讯作者：汤华。电话：（０２２）２３５４２５０３，Ｅ－ｍａｉｌ：ｔａｎｇｈｕａ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ

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中国慢性病预防与控制２００８年２月第１６卷第１期ＣｈｉｎＪＰｒｅｖＣｏｎｔｒＣｈｒｏｎＮｏｎ－ｃｏｍｍｕｎＤｉｓ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ２００８，Ｖｏｌ．１６，Ｎｏ．１

１材料与方法１．１材料

１．１．１试剂和仪器

正常人富含淋巴细胞白膜来自天

１．２．４ＭＴＴ法检测混合淋巴细胞增殖反应（ＭＬＲ）将ＴＡＡ冲击的ＤＣ（Ｓ１）和未进行冲击的成熟ＤＣ（Ｓ２）作为２种刺激细胞，调整细胞数为１×１０５／ｍｌ和０．５×１０５／ｍｌ，

加入丝裂霉素Ｃ２５ｕｇ／ｍｌ，３７℃孵育４５ｍｉｎ，自体淋巴细胞（Ｒ１）与同种异体淋巴细胞（Ｒ２）数为１×１０６／ｍｌ，效靶比为１０：１和２０：１接种９６孔板。ＭＴＴ法检测，于酶标仪上读取５７０ｎｍＯＤ值，并按照下列公式计算刺激指数（ＳＩ）：

ＳＩ＝实验组ＯＤ值／（反应细胞对照组ＯＤ值＋刺激细胞对照组ＯＤ值）〔６〕

津市血液中心；淋巴细胞分离液（比重１．０７７±０．００２）为天津血液研究所公司产品。试剂：ｒｈＧＭ－ＣＳＦ（特尔立，厦门特宝生物工程有限公司）、ｒｈＩＬ－４（ＰＥＰＲＯＴＥＣＨ）、

ｒｈＴＮＦ－ａ（Ｒ＆Ｄ美国）、ｒｈＩＬ－２（北京四环制药）、ｒｈＩＬ－１

鼠抗人ＣＤ３单抗（Ｒ＆Ｄ美国）、ｒｈＩＦＮ－α（深圳，丽珠制药）、

（Ｐｒｏｍｅｇａ），标记有ＦＩＴＣ－ＣＤ１ａ、ＣＤ８３、ＣＤ８０、ＣＤ４０、ＨＬＡ－

ＤＲ、ＣＤ４和ＰＥ－ＣＤ８６、ＲＤ１－ＣＤ８、ＰＣ５－ＣＤ３鼠抗人单克

隆抗体，ＦＩＴＣ和ＰＥ标记的ＩｇＧ羊抗鼠单克隆抗体以及标准品Ｃｙｔｏ－Ｃｏｍｐ均为法国Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ产品。流式细胞仪：ＢＥＣＫＭＡＮ－ＣＯＵＬＴＥＲＸＬ１００（ＢＤ公司）。

１．２．５

ＣＩＫ细胞和特

异性ＤＣ诱导的ＣＩＫ细胞，用含ＩＬ－１、ＣＤ３单抗、ＩＬ－２

体外特异性杀伤试验（ＭＴＴ法）

的完全培养液调至２×１０６／ｍｌ、１×１０６／ｍｌ作为效应细胞；以Ａ５４９、用完全培养液调至Ｃａｌｕ－６、８０３细胞为靶细胞。

１．１．２细胞系与实验动物Ａ５４９肺癌细胞系、Ｃａｌｕ－６

１×１０５／ｍｌ，效靶比为２０：１，１０：１。效应细胞和靶细胞各

用１００ｕｌ／孔，加入９６孔板。３７℃、５％ＣＯ２孵箱培养４８ｈ。

〔６〕

。计算杀伤率：ＭＴＴ法测波长５７０ｎｍ处的吸光度

杀伤率（％）＝（１－实验孔均值－效应对照孔均值）×１００％

靶细胞对照孔均值

肺癌细胞系、８０３胃癌细胞系由天津肿瘤医院中心实验室提供。６周龄ＢＡＬＢ／Ｃ裸鼠１６只（雌雄各半）购自北京动物研究所，由天津医科大学动物中心采用无菌条件饲养。

１．２方法

１．２．１外周血ＤＣ和ＣＩＫ细胞体外培养将新鲜抗凝白膜（１单位）用淋巴细胞分离液分离，获取单个核细胞，将细胞浓度调至４×１０６／ｍｌ，加入６孔板置３７℃、５％ＣＯ２孵育箱中贴壁孵育２ｈ。ＣＩＫ细胞的培养：将非贴壁细胞及培养液一同吸出，计数，离心１５００ｒｐｍ５ｍｉｎ，弃去上清后加入完全培养基。加入ＩＮＦ－γ（１０００Ｕ／ｍｌ），２４ｈ后添加ＩＬ－２（３００Ｕ／ｍｌ）、（１００Ｕ／ｍｌ），鼠抗人ＣＤ３ＩＬ－１α单抗（０．１μ每３～ｇ／ｍｌ）。４ｄ等量扩增，所加因子同上。ＤＣ细胞的培养：将贴壁细胞加入完全培养基（１６４０＋１０％ＦＢＳ）和ＩＬ－４１６０ｎｇ／ｍｌ、ＧＭ－ＣＳＦ１００ｎｇ／ｍｌ。于３７℃、５％ＣＯ２孵育箱中培养７ｄ（分离细胞的当天计为０ｄ）。在第３ｄ时取出贴壁的细胞进行半量换液，吸取一半培养液，加入适量的培养液，再补加ＩＬ－４和ＧＭ－ＣＳＦ继续培

〔３，４〕

养。第６ｄ在ＤＣ悬液中添加ＴＮＦ－α。（２０ｎｇ／ｍｌ）

１．２．２ＴＡＡ冲击的ＤＣ诱导ＣＩＫ细胞Ａ５４９肺癌细胞株反复置于－８０℃室温快冻慢融５次。２０００ｒｐｍ离心１ｍｉｎ使细胞碎片沉淀。用０．２２μｍ的滤器过滤后，用考马斯亮兰法测定蛋白浓度，－８０℃保存，作为肺癌细胞抗原备用。在培养ＤＣ的第４ｄ，在ＤＣ培养体系中加入肿瘤抗原（１００μｇ／ｍｌ）；在培养ＤＣ的第７ｄ，将经过抗

〔３－５〕

原冲击的ＤＣ与ＣＩＫ细胞按１：５的比例混合培养。１．２．３ＤＣ及ＣＩＫ细胞表型分析用培养第７ｄ的成熟ＤＣ、培养第１４ｄ的负载抗原的ＤＣ和培养第７、１４ｄ

的ＣＩＫ，计数后取１×１０５个细胞加入待测管。ＤＣ细胞细胞中加入ＣＤ１ａ、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＨＬＡ－ＤＲ及同型对照，

１．２．６体内抑瘤效果检验取６周龄ＢＡＬＢ／Ｃ裸鼠１６只

（雌雄各半）分为４组，每组雌雄各２只，将１×１０６个Ａ５４９肺癌肿瘤细胞接种于小鼠双侧腹股沟皮下，待肉

眼可见小鼠皮下长瘤后注射效应细胞治疗。分别于接种瘤细胞后的第３、７、１０、１５ｄ经瘤周注射１×１０７／０．２ｍｌ ＣＩＫ、ＤＣＣＩＫ、ＡｇＤＣＣＩＫ细胞，对照组注射０．２ｍｌ生理盐水，于初次注射效应细胞５周后，测肿瘤直径并杀鼠取瘤，比较其抑瘤作用。

１．３统计学处理采用ＳＰＳＳ１１．０统计软件包进行分析。

２结果

２．１正常外周血ＤＣ的形态变化

贴壁２ｈ的单核细

胞表现为形态不规整的类圆形轻微贴壁细胞。在细胞因子作用２４ｈ后细胞仍轻微贴壁，细胞体积及形态未见明显改变。培养３ｄ时，显微镜下可见少量的悬浮细胞和散在的细胞，细胞呈集簇生长。培养７ｄ时，悬浮的细胞明显增多，以散在的细胞为主，细胞体积增大，部分细胞可见表面由毛刺状的突起，呈不规则的树突状，并可见贴壁的巨噬细胞。见图１、２。

ＣＩＫ细胞中加入ＦＩＴＣ－ＰＥ标记的鼠抗人ＣＤ３、ＣＤ５６，

利用流式细胞仪分析细胞表型。

图１培养３ｄ时ＤＣ细胞的形态

中国慢性病预防与控制２００８年２月第１６卷第１期ＣｈｉｎＪＰｒｅｖＣｏｎｔｒＣｈｒｏｎＮｏｎ－ｃｏｍｍｕｎＤｉｓ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ２００８，Ｖｏｌ．１６，Ｎｏ．１

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１００．０８０．０杀伤率（％）

１０：１２０：１

６０．０４０．０２０．００．０

Ａ５４９

Ｃａｌｕ－６

８０３

图２培养７ｄ时ＤＣ细胞的悬浮状态

图４两种效靶比ＡｇＤＣ对不同瘤细胞杀伤率的比较

２．２

化

成熟ＤＣ及经抗原刺激成熟ＤＣ的表型变ＰＢＭＣ、２．５ＣＩＫ的体内抗肿瘤作用与注射生理盐水的对照

ＰＢＭＣ在ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－４以及促成熟细胞因子

ＴＮＦ－α的作用下呈现典型的成熟ＤＣ表型，即高水平

表达ＣＤ１ａ、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＨＬＡ－ＤＲ，而代表单核细胞的表面标志ＣＤ１４下降。抗原负载的ＤＣ表面标志则进一步升高，ＣＤ１４水平继续下降。培养７ｄ和１４ｄＣＩＫ细胞表达ＣＤ３＋ＣＤ５６＋表型细胞的大量增殖。见图３。

１００．０８０．０

单核细胞

组比较，ＣＩＫ细胞组、ＤＣＣＩＫ细胞组、ＡｇＤＣＣＩＫ细胞组抗肿瘤作用差别有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。表明３种处理方法均对肺癌小鼠模型具有治疗作用。ＣＩＫ细胞组的抗肿瘤作用与ＤＣ ＣＩＫ细胞组无差别（Ｐ＞０．０５），表 明ＤＣ不能增强ＣＩＫ的抗肿瘤作用。而ＡｇＤＣＣＩＫ细胞组的抗肿瘤作用高于ＣＩＫ组和ＤＣ ＣＩＫ组（Ｐ＜０．０５）。 小鼠注射ＣＩＫ、ＤＣＣＩＫ和ＡｇＤＣＣＩＫ后的肿瘤直径见表１。

７ｄ成熟的ＤＣ经过抗原诱导的ＤＣ

表１

对照

标志率（％）

小鼠注射ＣＩＫ、 ＤＣＣＩＫ和ＡｇＤＣＣＩＫ后的肿瘤直径

组别

数目

直径（±ｓ，ｍｍ）

５８６５

１２３．０６±２０．３１６５．３４±１２．３３ａｂ７０．１７±１３．２６ａｂ３６．７９±９．１９ａ

６０．０４０．０２０．００．０

ＣＩＫ ＤＣＣＩＫ ＡｇＤＣＣＩＫ

注：ａ与对照组比较，ｂ与Ａｇ ＤＣＣＩＫ组比较，经ｔ检验，Ｐ＜０．０１。

３

ＣＤ１ａ

ＣＤ８３

ＣＤ８０

ＣＤ８６

ＣＤ４０

ＣＤ１４ＨＬＡ－ＤＲ

表面标志

讨论

生物治疗中免疫活性细胞注射是目前治疗肿瘤的

图３不同状态下ＤＣ表面标志的变化

一个重要领域，其中ＤＣ与ＣＩＫ细胞的肿瘤免疫治疗作为两个主要部分，前者识别病原体、激活获得性免疫系统，后者通过发挥自身细胞毒性与分泌细胞因子杀伤肿瘤细胞。二者联合确保了一个高效的免疫反应的

〔６〕

完成。

２．３混合淋巴细胞增殖实验未经Ａｇ冲击的ＤＣ

与经Ａｇ冲击后的ＤＣ都能刺激同种异体Ｔ淋巴细胞增殖活性，而刺激自体Ｔ淋巴细胞增殖很弱。经Ａｇ冲击的ＤＣ对刺激异体淋巴细胞增殖的能力更强。

本研究在体外杀伤实验中采用了３种不同的肿瘤细胞系，其中Ａ５４９和Ｃａｌｕ－６为肺癌细胞系，８０３为胃癌细胞系；肿瘤抗原为Ａ５４９细胞的裂解物。结果表明，ＣＩＫ可有效杀伤３种靶细胞，但对３种靶细胞的杀伤作用无差别（Ｐ＞０．０５），表明ＣＩＫ细胞的杀伤作用是非特异性的。未负载抗原的ＤＣ可促进ＣＩＫ细胞的增殖，但不能使ＣＩＫ细胞的杀伤活性进一步增强。这可能与不同的靶细胞对ＣＩＫ细胞的敏感性不同或与靶细胞的细胞学特性有关，例如黏附分子表达水平较低，不能与ＣＩＫ细胞形成稳定的结合，但尚需进一步证实。ＣＩＫ细胞由负载抗原的ＤＣ细胞激活后，对Ａ５４９细胞的杀伤作用增强（Ｐ＜０．０５），而对另外２种靶细胞的杀伤作用未见明显增加，表明抗原负载的ＤＣ可使另外，体内肺ＣＩＫ细胞获得特异性杀伤靶细胞的能力。

２．４体外细胞毒试验结果以Ａ５４９肿瘤细胞裂解物

为抗原刺激ＤＣ细胞和未经刺激的ＤＣ细胞诱导的

ＣＩＫ细胞及单纯ＣＩＫ细胞作为效应细胞，比较其杀

伤Ａ５４９、Ｃａｌｕ－６、８０３肿瘤细胞的作用。结果ＤＣ／Ａ５４９抗原诱导的ＣＴＬ在效靶比为１０：１时，对Ａ５４９靶细胞具有明显杀伤作用（Ｐ＜０．０５）；对Ｃａｌｕ－６靶细胞和８０３靶细胞也有杀伤作用，但杀伤作用较

低。而单纯ＣＩＫ细胞及单纯ＤＣ诱导的ＣＩＫ细胞对

３种靶细胞的杀伤活性较低，且差别无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。当效靶为２０：１时，可进一步提高杀伤率，

但不能改变ＤＣ／Ａ５４９抗原诱导的ＣＩＫ细胞杀伤特异性。见图４。

２６

中国慢性病预防与控制２００８年２月第１６卷第１期ＣｈｉｎＪＰｒｅｖＣｏｎｔｒＣｈｒｏｎＮｏｎ－ｃｏｍｍｕｎＤｉｓ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ２００８，Ｖｏｌ．１６，Ｎｏ．１

癌动物模型的观察也获得了类似的结果：ＣＩＫ细胞和由未负载抗原的ＤＣ细胞激活的ＣＩＫ细胞对肿瘤的生长均具有显著的抑制作用，但二者抑制肿瘤生长的作用无差别（Ｐ＞０．０５）。而由抗原负载的ＤＣ细胞激活的

ａｃｕｔｅｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉｃｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｓｕｓｉｎｇｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅａｒｒａｙｓ〔Ｊ〕．ＥｘｐＨｅｍａｔｏｌ，２００５，３３：６７１－６８１．

〔２〕ＫｏｒｎａｃｋｅｒＭ，ＭｏｌｄｅｎｈａｕｅｒＧ，ＨｅｒｂｓｔＭ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓ

ａｇａｉｎｓｔａｕｔｏｌｏｇｏｕｓＣＬＬ：ｄｉｒｅｃｔｃｙｔｏｔｏｘｉｃｅｆｆｅｃｔｓａｎｄｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｉｍ．ＩｎｔＪＣａｎｃｅｒ，ｍｕｎｅａｃｃｅｓｓｏｒｙｍｏｌｅｃｕｌｅｓｂｙｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｇａｍｍａ〔Ｊ〕２００６，１１９：１３７７－１３８２．

〔３〕郭建巍，蔡美英，秦力维，等．树突状细胞负载肝癌可溶性抗原的免

疫应〔Ｊ〕．免疫学杂志，２００２，１８（２）：１２３－１２７．

〔４〕ＧｒａｕｅｒＯ，ＷｏｈｌｌｅｂｅｎＧ，ＳｅｕｂｅｒｔＳ，ｅｔａｌ．Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｍａｔｕｒａｔｉｏｎｓｔａｔｅｓｏｆ

ＣＩＫ细胞抑制肿瘤生长的作用增强，表明由抗原负载

的ＤＣ细胞激活ＣＩＫ细胞，使ＣＩＫ细胞获得特异性杀伤靶细胞的能力。分析ＤＣ瘤苗诱导的抗肿瘤作用机制可能与以下几个方面有关：（１）ＤＣ具有强大的刺激

Ｔ淋巴细胞增殖的能力；（２）ＤＣ表面有大量的树突状

突起，使之有利于大量接触抗原并提呈给Ｔ淋巴细胞；（３）ＤＣ高表达ＭＨＣＩ、ＩＩ类分子和ＣＤ８０／ＣＤ８６等共刺激分子，为Ｔ淋巴细胞充分活化提供信号刺激；（４）ＤＣ分泌ＩＬ－１２等多种细胞因子，促进Ｔｈ０细胞分化为Ｔｈ１细胞，从而诱导Ｔｈ１型细胞介导的免疫反应，并可维持和增强ＣＴＬ的活性

〔３，７〕

ｒａｔｂｏｎｅｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓｕｓｉｎｇａｎｉｍｐｒｏｖｅｄｃｕｌｔｕｒｅ〔Ｊ〕．ＨｉｓｔｏｃｈｅｍＣｅｌｌＢｉｏｌ，２００２，１１７：３５１－３６２．ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ

〔５〕ＺｈａｎｇＪ，ＺｈａｎｇＪＫ，ＨｏｗａｒｄＥ，ｅｔａｌ．Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙａｃｑｕｉｒｅ

ａｎｄｐｒｅｓｅｎｔａｎｔｉｇｅｎｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｃｅｌｌａｎｄｉｎｄｕｃｅａｎｔｉｇｅｎ－〔Ｊ〕．ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，２００３，５２：４１３－４２２．ｓｐｅｃｉｆｉｃＴ－ｃｅｌｌｒｅｓｐｏｎｓｅｓ

〔６〕ＣｏｏｐｅｒＭＡ，ＦｅｃｈｎｉｇｅｒＴＡ，ＦｕｃｈｓＡ，ｅｔａｌ．ＮＫｃｅｌｌａｎｄＤＣｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ

〔Ｊ〕．Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００４，５：４７－５２．

〔７〕ＦｒｅｄｅｒｉｋＨ，Ｉｇｎｅｙ，ＰｅｔｅｒＨ，ｅｔａｌ．Ｉｍｍｕｎｅｅｓｃａｐｅｏｆｔｕｍｏｒｓ：ａｐｏｐｔｏｓｉｓｒｅ

；（５）ＤＣ疫苗诱导的ＣＴＬ直接

．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＬｅｕｋｏｃｙｔｅＢｉｏｌｏｇｙ，ｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｔｕｍｏｒｃｏｕｎｔｅｒａｔｔａｃｋ〔Ｊ〕２００２，７１：９０７－９２０．

〔８〕ＧａｔｚａＥ，ＯｋａｄａＣＹ．Ｔｕｍｏｒｃｅｌｌｌｙｓａｔｅ－ｐｕｌｓｅｄｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓａｒｅｍｏｒｅ

杀伤肿瘤细胞或分泌细胞因子诱导肿瘤细胞凋亡及抑制肿瘤细胞增殖；（６）ＤＣ可通过分泌或外排一种具有抗原呈递能力的ｅｘｏｓｏｍｅ小体来诱导免疫反应，也提

〔８，９〕

高了ＣＴＬ的抗肿瘤能力。这些对推动ＤＣ疫苗和指

ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｔｈａｎＴＣＲｉｄｐｒｏｔｅｉｎｖａｃｃｉｎｅｓｆｏｒａｃｔｉｖｅｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙｏｆＴ〔Ｊ〕．ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００２，１６９：５２２７－５２３５．ｃｅｌｌｌｙｍｐｈｏｍａ

〔９〕ＳｅｇｕｒａＥ，ＡｍｉｇｏｒｅｎａＳ，ＴｈｅｒｙＣ．Ｍａｔｕｒｅｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓｓｅｃｒｅｔｅｅｘｏ

导临床治疗都具有非常的积极作用。

参考文献：

〔１〕ＬｉｎｎＹＣ，ＷａｎｇＳＭ，ＨｕｉＫＭ．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｉｎｇｏｆ

ｓｏｍｅｓｗｉｔｈｓｔｒｏｎｇａｂｉｌｉｔｙｔｏｉｎｄｕｃｅａｎｔｉｇｅｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｅｆｆｅｃｔｏｒｉｍｍｕｎｅｒｅ〔Ｊ〕．ＢｌｏｏｄＣｅｌｌｓＭｏｌＤｉｓ，２００５，３５：８９－９３．ｓｐｏｎｓｅｓ

（收稿日期：２００７－１０－１８；修回日期：２００８－０１－０９）

（本文编辑：黄丽媛）

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【知识园地】

怎样正确理解血糖生成指数

食物中的碳水化合物进入人体后经过消化分解成单糖，而后进入血液循环，进而影响血糖水平。由于食物进入胃肠道后消化速度不同，吸收程度不一致，葡萄糖进入血液速度有快有慢，数量有多有少，因此即使含等量碳水化合物的食物，对人体血糖水平影响也不同。专家提出用“食物血糖生成指数”（ＧＩ）的概念来衡量某种食物或膳食组成对血糖浓度影响的程度。一般而言，食物血糖生成指数大于７０为高ＧＩ食物，小于５５为低ＧＩ食物，５５～豆类、乳类、蔬菜是低ＧＩ食物，而馒７０为中ＧＩ食物。薯类、水果常因品种和加工方式不同特别是其中的膳食纤维的含量发生变化，而引起其ＧＩ的头、米饭是高ＧＩ食物。谷类、变化。最初食物血糖生成指数适用于糖尿病患者选择富含碳水化合物类食物的参考依据，现在广泛用于肥胖者和代谢综合征患者的膳食管理以及健康人群的营养教育中。

什么是营养强化食品

食物营养强化，就是在食物加工过程中人为地加入一些人体所必需的，但在日常膳食中又易缺乏的营养素，以保证人体的营养需要。在食品加工过程中经过这种人为添加了营养素的食品就称为营养强化食品。目前世界上已有６０多个目前正在启动的食物强国家通过立法的形式实行了食物营养强化。我国从２０世纪９０年代起就实行了食盐加碘的强化。化方案有：在大米、面粉中强化维生素Ｂ１、维生素Ｂ２、烟酸、叶酸、钙、铁，在食用油中强化维生素Ａ，在酱油中强化铁等。另外在市场上见到的还有许多添加了钙、铁、锌及维生素Ａ或维生素Ｄ的食品也都属于强化食品。对基础食物实行营养强化是改善人们营养素不足，主要是微量营养素不足的途径之一，人们可根据自身的生理特点和营养需求来选择适当的营养强化食品。

（摘自《中国居民膳食指南》）

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