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沈汪洋，金征宇’

（食品科学与技术国家重点实验室江南大学食品科学与工程学院，江苏无锡２１４１２２）

摘要：发芽咖啡豆ａ一半乳糖苷酶的提取研究中，植物多酚严重的干扰和影响了提取工作。为消除这种干扰，进行了植物多酚的去除研究工作。研究发现：明胶、牛血清白蛋白和聚乙烯聚吡咯烷酮等竞争荆中，１．Ｏ％（ｗ／ｖ）ＰＶＰＰ去除植物多酚的效果最好；正丙醇、乙醇、甲醇和丙酮等解析剂中，５０％（ｖ／ｖ）丙酮去除植物多酚的效果最好。ａ—Ｇａｌ提取液经过ＰＶＰＰ和丙酮处理，总酶活达到３０２ｎｋａｔ，比酶活为１９．６ｎｋａ∥ｍｇ。相对于去除植物多酚前的总酶活１４８ｎｋａｔ，比酶活７．１６ｎｋａ∥Ｊ醒，提高很多。

关键词：ｄ一蹦，植物多酚，去除，ＰｖＰＰ，丙酮

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中图分类号：Ｔｓ２０１．２文献标识码：Ａ文章编号：１００２—０３０６（２００８）０４—００９０—０３

发芽咖啡豆ｄ一半乳糖苷酶（ｑ—Ｄ—

ＧａＩａｃｔｏｓｉｄａｓｅ；妒Ｇａｌ；Ｅｃ３．２．１．２２）具有更高的活力，普遍高于绿咖啡豆来源的瑾一Ｇａｌ…，可作为提取ａ—Ｇａｌ的新酶源。发芽咖啡豆ｄ—Ｇａｌ的提取过程中，发现植物多酚严重干扰和影响提取工作，损失大量的ｄ—Ｇａｌ，而且使后续纯化工作变得异常困难。植物多酚作为一类天然大分子化合物广泛存在于植物体内，植物多酚与蛋白质的结合反应是其最重要的化学特征旧１。咖啡豆植物多酚主要是咖啡酸和奎尼酸结合而成的绿原酸＂’。细胞破碎后，咖啡豆中的植物多酚迅速与蛋白质可逆的结合，生成复合物沉淀。

收稿日期：２００７一ｌＯ一２２

通讯联系人

或是在多酚氧化酶的作用下，迅速氧化，被氧化的酚类化合物（如醌类）能与蛋白质稳定地结合形成沉淀，从而影响蛋白的分离纯化Ｈ“１。为了更有效的从发芽咖啡豆中提取ｑ—Ｇａｌ，必须尽量去除植物多酚。因此，选用多种竞争剂，和ｑ—Ｇａｌ竞争与植物多酚的结合，减少可逆复合物沉淀的产生；利用多种解析剂，使仪一Ｇａｌ和植物多酚的复合物沉淀解析，得到更多具有活力的Ｑ—Ｇａｌ。在提取的初步阶段就得到更多的酶活，为后续纯化工作奠定基础。

１材料与方法

１．１材料与设备

对硝基苯酚一理一半乳糖苷（ｐ—ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ一氆一ｇａｌａｃｔｏｐｙＴａｎｏｓｉｄｅ，ＰＮＰＧ）Ｓｉ乎ｌｌａ—ｍ出ｃｈ（上海）公司；牛血清白蛋白（ｂｏ、，ｉｎｅ

公司；聚乙烯聚吡咯烷酮（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｏｌｙｐｙＨｏｌｉｄｏｍ，ＰＶＰＰ）上海厚诚精细化工有限公司；明胶广州新

２ｌ：４４１～４４５．

作者简介：沈汪洋（１９７８一），男，博士研究生，研究方向：碳水化合物科

学与工程。

基金项目：国家高新技术研究发展计划（８６３）（２００６ＡＡｌｏｚ３３３）。

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［８］施安辉．ＡｓＰ一１号菌株谷氨酰胺酶的固定化及其性质的研究［Ｊ］．中国酿造，１９９６（２）：３ｌ一３３．

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ｋｔｔｅ碍，１９９９，

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