[综述]一氧化氮的生理病理作用及其检测方法(4)

测定NO 的线性回归方程为: Y = - 8. 10 ×10- 4 + 6. 14 ×10- 4 X , r = 0. 999 5 , P < 0. 001 ;检测下限浓度为3. 04 mol/ L ,平均回收率为98. 5 %; 测得健康人血清NO(NO2- / -NO3)的正常参考值范围为:30. 60 ±16. 16μmol/ L 。

4.4 催化光度法

[ 13 ]-- - 李桂兰等 先用镀铜镉颗粒将血清中NO3 还原成NO2,再根据NO2 对溴酸钾氧化还原

- 型罗丹明B 生色有强烈催化作用,进行NO2的催化光度法测定。这一类催化体系检出限最低

[ 14 ]- -可达10 - 12 g/ mL 。该方法的平均回收率为104. 1 % ,测得的健康人血清NO(NO2/ NO3)

的参考值范围为:54. 2 ±16. 9μmol/ L 。

4.5 示波极谱法

[ 15 ]孙成均等选择示波极谱法利用二阶导数极谱仪在盐酸- 磺胺- 盐酸萘乙二胺- 氨水

- - - 体系中测定血清中的NO2,以测定NO2 量间接推算NO 的量。此方法原理为:血清中的NO2 在

稀盐酸介质中与磺胺和盐酸萘乙二胺反应生成偶氮化合物,在氨碱性介质中生成的偶氮化合

- 物可产生灵敏的极谱波,波高与NO2 含量在一定范围内成正比关系,并利用峰高计算血清中

- - - 的NO2,该方法血清中的NO2的计算式为:血清中NO2含量(μmol/ L) = hx/ b ×1/ (0. 10 ×

- 46) [ 式中hx 为样品峰高,b 为工作曲线斜率,0. 10 为取样品量(mL) ,46为NO2摩尔质量] ;

本法检出限为0. 56 g/ L ,相应血清浓度为0. 61 mol/ L ,该方法平均加标回收率为100. 6 %;

- 测得健康人血清NO(NO2) 的正常参考值范围为:0. 85 ±0. 22μmol/ L 。

4.6 分光光度法

[ 16 ] 李恩民等利用自制的氢氧化铝[Al(OH)3 ]凝胶清除血清中的有色成分,得到无色透明

- 的血清脱色液。利用醋酸钠、对氨基苯磺酸及α- 萘胺溶液使标准管中NO2标准使用液和样

- 品管中血清脱色液分别显色,利用分光光度法检测血清脱色液中的NO2。本方法的检测下限

是0. 043μmol/ mL ,回收率是93. 5 % ,正常人血清NO 含量是0. 323 ±0. 022μmol/ mL 。

4.7 化学发光法

[ 17 ] -- - 邓学良等 建立了Luminol - I - NO2化学发光系统间接测定血清中NO2 ,此方法

- 的回归方程为Y = 7. 62 X - 0. 22 , r = 0. 991 2 , 测定NO2的线性范围为(0. 018～300)

[ 18 ]μg/ L , 检出限为0. 026 μg/ L 。这种方法与文献 中介绍的化学发光法(鲁米诺法)

- -不同。鲁米诺法的原理是NO 可被H2O2强烈的氧化生成ONOO,而ONOO可使鲁米诺氧化并在溶

- - 液中发出很强的光。因为只有NO 可以激发这一光化学反应,而NO2 和NO3则不能,所以该方

-13法是可对溶液中的NO 进行实时测定且检测灵敏度最高的方法,其检出限可达10 mol/ L ,

是直接测定NO 的方法。

5 小结

综上所述,NO是一种重要的病理生理因子,在人体多种系统疾病中发挥着作用。只有充分认识到其治病机制才能为疾病的治疗提供正确的理论基础。目前在NO研究中仍有许多问题需要解决,如:如何寻找一种选择性抑制i2NOS的物质,使体内NO产生适量并发挥生理作用。阐明NO与疾病发病过程中炎细胞介质和细胞因子之间的关系,确定NO在发病机制中的地位。相信随着对NO研究的不断进展,这些问题会逐步得到解决,从而为许多疾病的研究和预防治疗提供新的思路。

［ 1 ］ Ko sh land D E. NO new s is a good new s. [J] Science, 1992, 258: 1861～

1864

［ 2 ］ 王天云. 一氧化氮,新发现的一种信使分子[ J ] . 生物学通报,1999 ,34 (12) :40.