微生物药物学(5)

2 意义：了解活性物质的酸、碱性；溶解性；稳定性；极性等

2 从微生物培养物中提取活性物质有哪些方法 ?

答：1 溶剂提取法；2 吸附法；3 离子交换法；4 沉淀法；

3 简述天然产物色谱分离技术的发展概况。

答：20世纪60年代前，在吸附色谱的基础上发展起来分配色谱、离子交换色谱、分子排阻色谱等经典色谱。

60年代后，在经典色谱的基础上由于色谱填料的改进，检测技术的进步发展了高效液相色谱。

70年代后，在经典分配色谱的基础上发展了对流色谱。

4 经典色谱按分离机理的不同可分为哪四大类色谱?

答:一、吸附色谱 二、分配色谱法 三、离子交换及离子排斥色谱 四、凝胶色谱

5 简述四大经典色谱的概念（即进行物质分离的机理）。

答：吸附色谱：靠吸附剂对被吸附物中各组分吸附力不同而使不同组分分离。

分配色谱的概念： 利用混合物各在固定相和流动相间分配系数不

同而将不同组分离的色谱方法。

离子交换色谱的概念：以离子交换树脂为固定相，以适宜介质作

流动相，混合物中各组分由于离子交换能力的差异而彼此分离的

色谱方法。

分子排阻色谱的概念：使用凝胶作为固定相，混合物中小分子物

质可进入凝胶颗粒内而被滞留，中等分子可部分进入凝胶颗粒，

大分子物质不能进入凝胶颗粒内，不同分子量大小的物质受凝胶

颗粒的阻滞程度不同而分离的色谱方法。

6 高效液相色谱分离物质的原理及其优点是什么？

答：原理：当混合物进入色谱柱后，在固定相与流动相之间不断地进行分配平衡，平衡后由于各组分理化性质不同，在两相中分配的量不同，被流动相洗出色谱柱所需流动相的容积不同，也就是在色谱柱中的保留时间，从而使各组分彼此分离。

优点：检测的分辨率和灵敏度高，分析速度快，重复性好，定量精度高，应用范围广。适用于分析高沸点、大分子、强极性、热稳定性差的化合物。

7 高效液相色谱通过什么可实现经典色谱不同的分离机制？

答：在极性的硅胶颗粒表面键合不同性质的化学基团可具有前述经典色谱不同的分离机制。 8 使用键合相硅胶作基质的优点是什么？

答：①硅胶的强度大；②微粒硅胶的微孔结构和表面积易人为控制；③化学稳定性好。 9 HPLC的填料按键合到基质上的官能团可分为哪三类？

答：⑴反相填料：填料为非极性，官能团为烷烃，例如：C18(ODS)、 C8、C4等。 ⑵正相填料：填料为极性，官能团为 －CN氰基、－NH2氨基等。

⑶离子交换键合相填料：

阳离子官能团：－SO3H磺酸基、－COOH羧基等。

阴离子官能团：―R4N＋季铵基、-氨基等。

由于硅胶基质的键合相只能在pH＝2～7.5的范围内使用，而离子交换色谱要求有

更宽的pH范围，因此其基质现在仍主要使用聚苯乙烯和二乙烯苯。

10 HPLC的常用的ODS柱是指什么?

答：十八烷基硅烷键合硅胶填料

11 一般ODS柱使用什么作为流动相?

答：一般ODS柱使用甲醇或乙腈的水溶液作为流动相