安徽农业科学， J o u r n a l o f An h u i A s h.S e i . 2 0 1 3, 4 1 ( 1 9 ): 8 1 4 6— 8 1 4 8

责任编辑

石金友

责任校对

卢瑶

正交试验优选灵芝多糖的提取工艺陈乃东 一，陈琼，何健( 1 .皖西学院生物与制药工程学院，安徽六安 2 3 7 0 1 2; 2 .皖西中药与天然药物工程技术研究中心，安徽六安 2 3 7 0 1 2 )

摘要[目的]对灵芝多糖的提取工艺进行优选。[方法]将灵芝在 5 0℃条件下干燥恒重，过4 J D目筛，用无水乙醇对灵芝干粉进行脱脂预处理，脱脂完毕风干后在不同的料液比、温度、提取时间的条件下进行单因素试验，并在单因素试验的基础上进行正交试验获得最佳提取工艺。[结果]灵芝多糖的最佳提取工艺为：料液比 1: 2 0 ( W/ V, g/ m l,下同),提取时间为 3 h,提取温度为 9 0℃;在此条件下，灵芝多 糖得率可达 1 . 6 1%。[结论]该方法优选了灵芝多糖的提取工艺条件，为灵芝多糖的进一步开发利用提供了依据。关键词灵芝( G AN O DE R MA);多糖；正交试验中图分类号 S 5 6 7 . 3 1 文献标识码 A 文章编号 0 5 1 7— 6 6 1 1 ( 2 0 1 3 ) 1 9— 0 8 1 4 6一 O 3O’ pt i mi z i n g Ex t r a c t i o n Te c hn i qu e f o r Ga no d e r ma l u c i d u m Po l y s a c c h a r i de by Or t h o g o na l Te s t

CI玎 E N N a i - d o n g e t a l ( C o l l e g e o f B i o t e c h n o l o g y a n d P h a r ma c e u t i c a l E n g i n e e r i n g,We s t An h u i Un i v e r s i t y,I J u’ a n,A n h u i 2 3 7 0 1 2) A b s t r a c t『 0 b i e c t i v e]T 0 o p t i m i z e t h e e x t r a c t i o n t e c h n i q u e o f G a n o d e r m a f u c i d u m p o l y s a c c h a r i d e .{ M e t h o d I G a n o d e r m a f u

c i d u m w e r e d i r e du n d e r 50℃ .a t f e r 4 0 S U n n y d a y s。d e f a t t i n g p r e t r e a t me n t wa s c o n d uc t e d o n Ga n o d e r l ' n a 2 u c i d u m d r y p o wde r wi t h a b s o l u t e e t h y l a l c o h o 1 .Af t e r a i r— d yi r n g,s i n g l e— f a c t o r t e s t wa s e a￣i e d o ut u n d e r d i f f e r e n t s o l i d— l i q u i d r a t i o,t e mp e r a t u r e,e x t r a c t i o n t i me s . On t h e b a s i s o f t h i s,o r t h o g o n a l

t e s t wa s c o n d u c t e d t o o b t a i n t h e o p t i mu m e x t r a c t i o n t e c h n i q u e .『 R e s u l t]T h e o p t i mu m e x t r a c t i o n t e c h n i q u e i s:s o l i d— l i q u i d r a t i o 1: 2 0( W/ V, g/ ml,t h e s a me a s f o l l o w s ), e x t r a c t i o n t i me 3 h,t e mp e r a t u r e 9 0℃;u n d e r t h e a b o v e c o n d i t i o n s, t h e y i e l d o f G a n o d e r ma l u c i d u m p o l y s a c c h a—r i d e r e a c h e d 1 . 6 1% .f C o n c l u s i o n]T h e me t h o d o p t i mi z e d t h e e x t r a c t i o n t e c h n i q u e f o r G a n o d e l T l z a 2 u c i d u m p o l y s a c e h a r i d e,w h i c h w i l l p r o v i d ea r e f e r e n c e or f f u r t he r d e v e l o p me n t a n d u t i l i z a t i o n . Ke Y wo r d s Ga n o d

e r ma l u c i du m:P o l y s a e c h a r i d e:Or th o g o n a l t e s t

灵芝 ( G A N O D E R MA)是多孔菌科真菌赤芝[ G a n o d e r m a l u c i d u m( L e y s s . e x F r . )K a r s t .]或紫芝[ G a n o d e r ma￥ i l l￣ n s e Z h a o, X u e t Z h a n g J的干燥子实体，全国大部分地区均有分布，多生于栎树及其他阔叶树的腐木上。商品用灵芝大多为人工培养，全年采收，除去杂质，剪除附有朽木、泥沙或培养基质的下端菌柄，阴干，然后在 4 0~ 5 O℃烘干。灵芝首

度计，购自北京普析通用仪器设备有限公司； S F一 1 3 0型粉碎机，购自长沙市岳麓区中南制药机械厂； F A一1 0 0 4型电子天

平，购自上海精科天平厂； 4 0目标准检验筛，购自浙江省上虞县纱筛厂； R E一5 2 D型旋转蒸发器，购自上海浦沪仪器厂； H H一6型数显恒温水浴锅，购自金坛市富华电器有限公司。 1 . 1 . 3 主要试剂。无水乙醇，购自扬州沪宝化学试剂有限公司； 1一萘酚和浓硫酸，购自汕头市西陇化工厂有限公司；

载于东汉时期我国最早的本草学专著《农本草经》,历代医家都认为灵芝能治疗多种疾病，故将其列为上品。灵芝多糖

葡萄糖、苯酚等均为分析纯，市售；蒸馏水，自制。1 . 2方法

为灵芝的主要成分之一，微溶于水，在热水中溶解度较大，不溶于乙醇等有机溶剂。灵芝味甘性平，归心、肺、肝、肾经，能补气安神、止咳平喘。灵芝多糖具有免疫调节、降血脂、降血糖、抗氧化、抗衰老及抗肿瘤作用，受到医药科技工作者的高度关注。笔者对灵芝多糖的提取、鉴定及提取工艺条件进行探讨，以期为深入研究灵芝的药理活性、灵芝的质量评价提供参考依据。1材料与方法 1 . 1 材料

1 . 2 . 1 灵芝多糖的提取。将灵芝在 5 0℃烘干至恒重，研碎

成粉末，过4 0目筛，制得灵芝干粉。称取灵芝子实体粉末2 . 0 0 0 g,用 2 0 mI无水乙醇浸泡 2 4 h,用双层纱布过滤风

干。按料液比 1: 2 0加入蒸馏水，在

9 0℃的水浴锅中水浴浸提 3 h,蒸发浓缩至 5 r I 1 l,加入 2 0 m 1的无水乙醇，在冰箱中 4℃醇沉过夜；过滤，于恒温箱中干燥至恒重，得灵芝粗多糖。 。

1 . 2 . 2 灵芝多糖的鉴定。将灵芝粗多糖加水 2 O m1制成样品溶液。取 1 . 0 ml置于试管中，加入 2滴浓度 1 0%的 1一萘酚乙醇溶液，振摇片刻，倾斜试管，沿管壁小心加入 1 . 0 ml浓硫酸，缓慢竖直后观察两层界面处的颜色变化1 . 2 . 3 灵芝多糖的测定方法…。

1 . 1 . 1 研究对象。灵芝，购于六安市世纪联华超市，品种经皖西学院陈乃东博士鉴定为赤芝属多孔真菌一灵芝科赤灵芝( G l u c i d u m)。

。

1 . 1 . 2 主要仪器。1 0 1 A 5—2型不锈钢数显电热鼓风干燥

箱，购自上海浦东跃欣科学仪器厂； 7 5 2紫外一可见光分光光基金项目国家自然科学基金 ( 8 1 2 7 4 0 2 1 ); 安徽高校省级科学研究项目( 1 ( J 2 0 1 2 A 2 7 7, K J 2 0 1 0 8 2 5 9 );六安市定向委托皖西学院市级研究重点项目( 2 0 1 1 L WA 0 0 1 );皖西学院研究性学习项目( WX X Y X 2 0 l 3 0 5 5 . WXX Y X 2 O 1 3 0 5 9 )

1 . 2 . 3 . 1 线性关系的考察。精确确称取干燥恒重的标准葡萄糖 5 0 . 0 0 mg,定容于 1 0 0 m l容量瓶中，配制成浓度为 0 . 5 0 0 m g/ ml的葡萄糖标准溶液。取上述溶液 1 0 r n l定容于 5 0 r n l容量瓶中，配制成浓度为 0 . 1 0 0 0 mg/ ml标准葡萄糖溶别置于 1 O r n l具塞试管中，补水至 2 r n l,然后加入 t . 0ml浓度

作者简介陈乃东 ( 1 9 7 2一),男，安徽金寨人，副教授，博士后，从事天液。精密吸取葡萄糖标准液 O . 2、 0 . 4、 0 . 6、 0 . 8和 1 . 0 m l,分然药物活性成分分离鉴定、中药与天然药物质量标准与质量控制研究， E . ma i l: 2 0 0 4 e n d@1 6 3 . c o n。O1 3 _ o 5. 2 2 收稿日期 2

5%苯酚溶液，摇匀，迅速加入 5 r

n l浓硫酸，摇匀后室温下放