异育银鲫非O1_非O139群霍乱弧菌的分离及鉴定(3)

132中国预防兽医学报2013年

对显示其相似性高达99.93%。结合比对结果所构建的系统发育树表明，菌株SX-1与霍乱弧菌聚类在一起，具有较近的亲缘关系(图2)。

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V.harveyiatcc14126T(X74706)V.harveyi(HM008702)V.alginolyticus(X74690)

V.alginolyticusATCC17749T(X56576)V.vulnificusATCC27562T(X76333)V.vulnificus(X74727)V.anguillarum(EF467287)

V.anguillarumATCC19264T(X16895)V.ordalii(EU107976)

V.ordaliiATCC33509T(X74718)V.mimicusATCC33653T(X74713)V.mimicus(DQ068934)V.cholerae(EF684899)SX-1

V.choleraeCECT514T(X76337)

A.hydrophilaATCC7966T(CP000462)

图2根据16SrDNA序列所构建的菌株SX的系统发育树Fig.2Phylogenetictreebasedonthe16SrDNAsequences

2.5

图1菌株SX的电镜照片(Bar=200nm)

Fig.1ElectronmicrographofstrainSX(Bar=200nm)

血清型菌株SX与O1群、O139霍乱弧菌多

价诊断血清不发生凝集，为非O1/非O139群霍乱弧菌。2.6

药物敏感性

菌株SX对氟哌酸，卡那霉素，

萘啶酸，罗红霉素，利福平，美满霉素，菌必治，丙氟哌酸，恩诺沙星，先锋霉素V，头孢他啶，左氟沙星和阿莫西林等抗生素敏感(表2)。

表1分离菌株的生理生化特性

Table1Physiologicalandbiochemicalcharacteristicsof

isolatesfromdiseasedCarassiusauratusgibelio

SX霍乱弧菌*实验项目

(n=5)V.choleraeTest

--革兰氏Gram

++运动性

Motility

++氧化酶

Oxidase

++接触酶

Catalase

--葡萄糖产气Gasfromglucose

++葡萄糖产酸

Acidfromglucose

-nd棉籽糖

Raffinose

--阿拉伯糖Arabinose

--乳糖Lactose

-nd果糖

Fructose

-d甘露糖

Mannose

-d蔗糖

Sucrose

--山梨醇

Sorbitol

++半乳糖

Galactose

--肌醇

Inositol

nd-水杨苷

实验项目Test

七叶苷Aesculin侧金盏花醇AdonitolDNA

硝酸盐还原Nitratereduction吲哚产生

Indoleproduction明胶液化

Gelatineliquefication甲基红试验MRVP试验VPtest

鸟氨酸脱羧酶

Ornithinedecarboxylase精氨酸双水解酶Argininedihydrolase赖氨酸脱羧酶Lysinedecarboxylase脲酶Urease产H2S

H2SproductionO/129(10μg)SensitivitytoO/129O/129(150μg)SensitivitytoO/129霍乱红反应

SX霍乱弧菌*(n=5)V.cholerae

nd--+++++-+-+--SS+

nd+++++d+-+--SS+

3讨论

霍乱弧菌能引起人类的急性肠道传染病，其中仅O1和O139群能引起霍乱流行，而非O1/非O139群霍乱弧菌则不引起发病或仅引起散发性腹泻病例和肠道外感染[8]。然而近几年来关于非O1群霍乱弧菌感染水产动物的报道却日益增多，引起普遍关注。非O1群霍乱弧菌感染最早是由Muroga等在日本野生的香鱼中发现[9]，此后该病多次发生并造成香鱼大规模的死亡[10]。此外，在中国对虾[11]、南美白对虾[12]、金鱼[13]、暗纹东方鲀[14]和泥鳅[15]等水产动物中也都陆续发现了该菌感染所致的疾病。本实验从患病异育银鲫中分离得到优势菌株，经电镜观察、常规生理生化测试、16SrDNA序列分析以及血清型等测定，综合考虑将其鉴定为非O1/非O139群霍乱弧菌。动物回归试验结果证明该菌株符合Koch法则的要求，因此可以确定霍乱弧菌就是导致此次异育银鲫发病死亡的致病原。异育银鲫霍乱弧菌病的发现，扩大了非O1群霍乱弧菌感染宿主的范围，表明霍乱弧菌感染也会对异育银鲫养殖业造成威胁，应在养殖生产中重视。

非O1/非O139群霍乱弧菌广泛分布于自然界水体中，是一种机会致病菌，感染的发生与养殖水体环境恶化密切相关。

因此，在养殖过程中要注重

Note:+:Positive;-:Negative;nd:Nodata;d:Variableresults;*From

SystematicIdentificationManualofCommonBacteria,Bergey'sManualofDeterminativeBacteriology,BacteriafromFishandOtherAquaticAnimals:apracticalidentificationmanual