基因组DNA分离及纯化

实验一 全基因组DNA的分离及纯化 由于分离线粒体DNA繁琐、耗时、成本相对较高，目前很多研究采用先分的全基因组DNA，再用特异的引物扩增线粒体基因组的方法，因此获得高纯度全基因组DNA显得尤为重要。

现在有很多的商品化试剂盒可以快速高效的从血液，组织中提取基因组DNA，简便快捷，DNA的得率和纯度都很高 。我们就TaKaRa DNA提取试剂盒为例，介绍外周静脉血全基因组DNA提取的操作流程。

目的：掌握试剂盒提取外周血细胞基因组DNA的方法。

原理：本试剂盒是用于动物组织、植物材料、全血和培养细胞（Animal tissues/Plants/Blood/Cultured cells）等全基因组DNA的广谱型小量纯化试剂盒。该试剂盒采用独特的细胞裂解系统，由细胞裂解液裂解细胞释放基因组DNA，然后使用特殊的相分离法除去蛋白质、多糖以及脂质等杂质，再结合DNA制备膜技术纯化基因组DNA。本试剂盒具有高效、快速、方便之特点，全套操作约需1小时便可完成。使用本试剂盒可从1～100 mg的动物组织、10～200 mg的植物材料、10～200 μl的全血（含抗凝剂）、10～10的培养细胞中纯化得到多至数十微克的高纯度基因组DNA。此基因组DNA可用于PCR反应、Southern杂交以及RAPD、AFLP、RFLP等多种分子生物学实验。

试剂：该DNA提取试剂盒包括：试剂Set （表4-1）和Column Set（表4-2）。 57

表4-1 DNA提取试剂盒试剂试剂Set 试剂名称 体 积

RNase A1（50 mg/ml）*1 65μl

Solution A*2 45 ml

Solution B*2 24 ml

Solution C原液*3 1.1 ml

DB Buffer 24 ml

Rinse A 28 ml

Rinse B*4 24 ml

Elution Buffer 12 ml

注：*1 RNase A1为混浊溶液，使用时请混匀后使用。

*2 若出现沉淀，请于65℃加热溶解，待恢复至室温后使用。

*3 首次使用前，请将1.1 ml的Solution C原液移入125 ml的Solution C空瓶中，然