肿瘤细胞膜模型筛选抗肿瘤多肽新方法的建立

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温浙盛，等6肿瘤细胞膜模型筛选抗肿瘤多肽新方法的建立

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5T0P和核糖体表达法可以筛选到已知对照穿孔多肽UEV@/!J排除了阳性结果是来自GW)4的非特异性结合和.)4模板消化不完全J确立了核糖体体外表达法和肿瘤细胞脂质体膜模型NKOSK1J5T0P。在肽库设计上采取在编码三连体中第一位和第二位核苷酸不设碱基限制J而在第三位核苷酸限定为X和YJ

减少在固相合成.)4寡核苷酸库中终止码（X44XY4X4Y）出现机会。再利用基因重组技术J在GW)4水平上在寡核苷酸库两端加上环型结构以增加GW)4的稳定性J同时在肽库非活动端插入F’(Z%B结构增加表达多肽的活动度。完成组建的肽库在筛选前分别与生物素标记N?’A@’(C&E@%[P的4(@’+\&E]和正常人体细胞膜模型结合J去除因.)4库组建的过程中发生移码突变和能与正常人体细胞膜模型结合的那部分多肽J增加筛选抗肿瘤多肽的特异性。经"个循环筛选的特异结合的KWU复合体逆转录扩增成.)4J利用X^K^X4$&A(’(]2’@将扩增后的.)4产物进行克隆。挑选的7-个单克隆测序结果表明<有/!个单克隆含有相同序列W;NYS1PJ_个单克隆含有相同序列WF4‘YJ在这些含相同序列的多肽中很少含有/个或/个以上的半胱氨酸J极性和非极性氨基酸按周期性有序排列有利于!+螺旋结构形成。分别从三组序列中各选择一列有高度!+螺旋结构形成倾向的肽链N1%345J1%3:5和1%3$!"P在体外固相合成J研究在体外抗非小细胞肺癌细胞株)$*+,#"-的效果。结果显示：1%345J1%3:5有抑制)$*+,#"-效果J而1%3$!"则无效J说明经膜模型筛选的抗肿瘤多肽有抗肿瘤作用J但难以避免非特异性多肽在筛选过程中与膜模型结合导致无效多肽产生。三条肽链对正常人体成纤维细胞均无影响J说明利用体外多肽表达系统和合适的膜模型J筛选特异性的抗肿瘤多肽是可行的。从而有望为肿瘤治疗提供特异性高J副反应低的抗肿瘤多肽J建立一种简便、可靠的寻找抗肿瘤多肽方法。随着肿瘤膜模型和体外表达系统的不断完善J解决好多肽不被体内蛋白酶水解，将抗肿瘤多肽应用于临床已不再遥远。

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!讨论

化学药物治疗是恶性肿瘤综合治疗主要措施之一J肿瘤细胞耐药性的产生是多数肿瘤不能得到治愈的根本困难所在。尽管目前已采取一些逆转肿瘤细胞耐药措施如应用K+糖蛋白竞争抑制剂异搏定等J但并未得到确切效果L"MJ原因是肿瘤细胞耐药并非单一机制J有许多因素共同参与。

多肽之所以能抗肿瘤是因为肿瘤细胞膜红血细胞蛋白功能缺失J细胞膜磷脂分布非对称性被破坏，

（K1）磷脂酰乙醇胺NKOP与磷脂酰丝氨酸大量地出现在细胞膜的外层。多肽链中带正电荷的极性氨基酸J与肿瘤细胞膜表层带负电荷的磷脂NK1P借静电引力作用使多肽聚集于肿瘤细胞膜表面。聚集的多肽呈现!+螺旋结构J非极性的一侧疏水氨基酸借疏水作用伸入细胞膜内层J在肿瘤细胞膜上形成无数小孔导致细胞内容物外流J达到杀死肿瘤细胞的作用L0M。多肽的这种抗肿瘤作用机制已得到多项实验研究证实LQR!-M。

研究表明多肽抗肿瘤有几个方面的药用价值：（!）多肽的作用机制完全不同于传统的抗肿瘤药物，其作用靶点是位于肿瘤细胞膜上带负电荷的磷脂。肿瘤细胞要产生耐受抗肿瘤多肽J需要在细胞膜的合成和磷脂的分布等环节上有一系列突变，因而在（/）目前使用使用过程中不易产生具抗性的突变株；

的化疗药物既能杀灭肿瘤细胞但也能破坏正常的人体细胞，造成很大的副作用。而多肽具备能选择性地抑制肿瘤细胞生长，对人体正常细胞影响非常有限，这样可以通过增加药物浓度提高抗癌效果而不必过

（5）多肽于担心增加药物浓度所带来的副反应L!!M；的抗肿瘤活性很高，其对肿瘤的致死浓度均在对正常细胞毒性却很小。因此，抗肿瘤"GA&SF级，

多肽有望成为新一代的抗肿瘤药物。

如何建立一种简便、可靠的寻找抗肿瘤多肽的方法是将抗肿瘤多肽应用到临床治疗的前提。我们首先通过预实验证实利用肿瘤细胞膜模型NKOSK1J

考文献M

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