肿瘤细胞膜模型筛选抗肿瘤多肽新方法的建立(2)

磷脂酰丝氨酸)*+,-*+./0123-6<056，磷脂酰甘油7=9，)*+,-*+./0123>3246<,3，7?9和胆固醇)>3246<,39购自@A.5/07,3.<B0*01-。?8CD04+78D、E56C=/6*D(C78D试剂盒、链亲和素化磁力珠和分离器购自D,4+6。(F体外一步法转录和翻译系统购自@:G0,5&?CHI微离心柱采自@:6<-+.:*+.<:.40.G0,/64+&实验所需引物和JK@寡核苷酸购自(.L.D.，其它所需实验材料和实验设备实验室都已具备。!"#

脂质体膜模型制备及固定

不同成分和比例磷脂)78、7?、7;、7=、8+,39HM:>&加入NO4.*CG0,/05327;&溶于H:3有机溶剂氯仿中。利用氮气喷射蒸发形成薄膜&再加入缓冲液)(P=9!QI:3&超声处理至清亮透明。再通过滤膜)MQ!!:R03/6<9HM次以上过滤形成双层脂质体&借助于-/<6*/.A0105CG0,/05共价键固定于链亲和素化磁力珠上&完成膜模型制备及固定。依据文献#N%选择脂质体)78S7?S8+,3&!MT!T!9作为正常人体细胞膜模型&不同比例磷脂：78S7;S7=S8+,3)!MT!T!T!9、78S7;S7=)!MT!T!9和7;S7=)$TF9作为候选肿瘤细胞膜模型。!"$

检验筛选对照多肽的设立

（LKUL?V@?’@LLBB?LKU选择肽链’.-/H!

图![0>\<6!

多肽JK@库的组建8,5-/<\4/0,5,R*6*/01630G<.<2

(F](F*<,:,/,<Q=J]<0G,-,:6CG05105>-0/6Q[3.>]R3.>/.>-6^\6546QB05X6<]4,5/.0505>!"<6*6./61???=Q

@--6:G361R36_0G36305X6<-‘0/+[B@?/.>.51.$a-/6:C3,,*-‘+04+.<6X5,‘5/,-/.G030b6:DK@.>.05-/DK.-6./$a651/+<,\>+<6-/<04/0,5.5130>./0,5&/+6-6.--6:G361305X6<--6<A6.-.-*.46<Q(+6JK@30G<.<2654,105>/+6*,32*6*/016,R05/6<6-/05>0-4\/‘0/+WG.V./$a651,R/+6*,32*6*/016<6>0,5&.5130>./61/,/+6.--6:G361-*.46<Q(+630>./0,5:0_/\<6‘.--\G-6^\65/32.:*30R061G2?8C<04+78D‘0/+*<0:6<-[30G.51D-*.46<Q78D*<,1\4/-‘6<6*\<0R061.514\/‘0/+K16V./Ia651&/+6530>./61/,/+6<6^\0<61\*-/<6.:636:65/-)(F*<,:,/,<&

-/6:C3,,*&.51-+056CJ.3>.<5,-6^\6546916<0A61R<,:*;(C$.G24\//05>‘0/+P>V.51K16VQ(+6-64,5130>./0,5:0_/\<60--\G-6^\65/32.:*30R061G2?8C<04+78D‘0/+*<0:6<-(F\*.51D-*.46<Q(+6R05.34,5-/<\4/61JK@30G<.<2‘.-\-61R,<<0G,-,:6

10-*3.2Q

!")核糖体表达*+,-#!.*+,-/0+1+23和肽库筛

选流程

用于多肽和蛋白质表达的技术主要有核糖体表

（(@@&(?@&(@?）达法&其原理是将重组基因终止码

移去&体外翻译的多肽不会从核糖体上脱离，从而与核糖体及:DK@形成)76*/016-CD0G,-,:6C:DK@&

基因型和表型连接复合体。目前的生物学技术7D’）

要检测功能性多肽的信息或序列还存在很多困难，而利用分子克隆技术检测其基因信息就变得非常容易。因而核糖体表达法的优点体现在可以通过检测其基因型来捕捉到功能表型的信息，通过D(C78D技术得到分离后多肽基因的序列从而可以获得功能多肽的序列。!"4

检测核糖体表达法筛选穿孔多肽的可行性设立对照反应&利用核糖体表达法分别表达

和’.-/,*.<.5W)KUL?V@?’@LLBB9作为阳性B’）

对照多肽&检测穿孔多肽可筛选的可行性。肽链’.-/H!是仅能在肿瘤细胞膜上穿孔而对正常人体细胞膜无穿孔能力的肽&肽链’.-/,*.<.5W可以既在肿瘤细胞膜又可在正常人体细胞膜上穿孔的肽#N%。!"%

用于多肽表达&’(的设计和组建