现代生化技术习题(6)

大分子提取分离 层析技术 电泳技术

极 移动； 静电荷为零 的分子在电场中不移动。分子在电场中移动的速度主要决定于于颗粒所带 净电荷的量 ，同时受分子的 大小 和 形状 的影响。

3. 影响电泳的外界因素有电场强度 、 溶液的pH值 、 溶液的离子强度 、 电渗 以及缓冲液的粘度和温度。

4. 凝胶电泳与其他电泳的主要区别，在于凝胶电泳同时具有电荷效应 和 分子筛效应的双重作用，具有很高的 筛选效率 。

5. 聚丙烯酰胺凝胶电泳按其凝胶系统的组成可分成 连续 凝胶电泳 、 不连续 凝胶电泳、 梯度 凝胶电泳和 SDS 凝胶电泳。

6. 不连续电泳的凝胶由上至下可分为 样品胶 、 浓缩胶 、 分离胶 。

7. 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，其迁移率主要取决于它 所带的电荷 以及分子的大小和形状 。在聚丙烯酰胺系统中加入SDS，则蛋白质分子的迁移率主要取决于其 相对分质量 ，而与它的 所带的电荷 及 分子的形状无关。

8. 在聚丙烯酰胺凝胶不连续电泳系统中不仅具有 电荷效应 效应和分子筛效应 效应，而且还具有 浓缩效应 效应，因此比连续电泳系统具有更高的分辨率和区带清晰度。

三、问答题

1. 试述聚丙烯酰胺凝胶具有哪些的优点：（１）在一定浓度时，凝胶透明，有弹性，机械性能好；(2)化学性能稳定，与被分离物不起化学反应，在很多溶剂中不溶；(3)对pH和温度变化较稳定；(4)几乎无吸附和电渗作用，只要Acr纯度高，操作条件一致，则样品分离重复性好；(5)样品不易扩散，且用量少，其灵敏度可达10-6g；(6)凝胶孔径可调节，根据被分离物的分子量选择合适的浓度,通过改变单体及交联剂的浓度调节凝胶的孔径；(7)分辨率高,尤其在不连续凝胶电泳中，集浓缩、分子筛和电荷效应为一体。因而较醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳等有更高的分辨率。

2. 等电聚集电泳具有哪些优缺点：优点： ⑴分辨率高；⑵随电泳时间增加区带越来越窄；⑶样品加在任何部位都可以聚焦到等电点pH位置；⑷很稀的样品都可分离，且重现性好；⑸可用于测定多肽或蛋白质的等电点。缺点：①要求使用无盐溶液，但某些蛋白质在无盐溶液中溶解度低，易产生沉淀。②对一些在pI不溶解或发生变性的蛋白质不适用。

3. 对载体两性电解质有什么要求：①在pI处必须有足够的缓冲能力，以便控制pH梯度。②在pI处必须有足够的电导，以便使一定电流通过。而且，各不同pI值的载体有相同的电导系数，使整个体系中电导均匀，获得均匀的电场。③相对分子质量要小，以便在聚焦后能容易地和蛋白质组分分开。④化学组分不同于被分离物质，以免干扰测定。⑤不与被分离物质起化学反应，也不会引起被分离物质变化。