细胞培养及无菌操作(4)

发布时间:2021-06-06

你还在为没有做过细胞培养实验而烦恼吗?你还在为做细胞实验而痛苦吗?看了这个《细胞培养的有关名词及其概念》相信一定会释疑我的烦恼

3. 胶帽,离心管帽烘干后只能在2%氢氧化钠溶液中浸泡6-12小时(切记时间不能过长),自来水洗净,烘干。然后再泡入盐酸液30分钟,再用自来水,蒸馏水,三蒸水洗净,烘干。最后装入铝盒内高压消毒,烘干备用。

4. 胶头可用75%酒精浸泡5分钟,然后紫外照射后使用即可。

5.塑料培养瓶,培养板,冻存管:

6.其他消毒方法:有的物品既不能干燥消毒,又不能蒸气消毒,可用70%酒精浸泡消毒。塑料培养皿打开盖子,放在超净台台面上,直接暴露在紫外线下消毒。也可用氧化乙烯消毒塑料制品,消毒后需要用2—3周时间洗除残留的氧化乙烯。用20000-100000rad的r射线消毒塑料制品效果最好。为了防止清洗器材已消毒与末消毒发生混淆,可在纸包装后,用密写墨水作好标记。其法即用沾水笔或毛笔沾以密写墨水,在包装纸上作一记号,平时这种墨水不带痕迹,一经高温,即出现字迹,从而可以判定它们是否消毒。密写墨水的配制:氯化钻(CoC12·6H2o)2g,30%盐酸10m1,蒸馏水88m1。

注意事项:

1.严格执行高压锅的操作规程:高压消毒时,先检查锅内是否有蒸馏水,以防高压时烧干,水不能过多因为其将使空气流畅受阻,会降低高压消毒效果。检查安全阀是否通畅,以防高压时爆炸。

2.安装滤膜时注意光面朝上:注意滤膜光滑一面是正面,要朝上,否则起不到过滤的作用。

3.注意人体的防护和器皿的完全浸泡:

A.泡酸时要戴耐酸手套,防止酸液溅起伤害人体。

B.从酸缸内捞取器皿时防止酸液溅到地面,会腐蚀地面。

C.器皿浸入酸液中要完全,不能留有气泡,以防止泡酸不彻底。

四 细胞培养用液的配制与消毒

器材与试剂:干粉型培养基、胰蛋白酶,青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器。

具体步骤:

一. 水的制备:

细胞培养用水必须非常纯净,不含有离子和其他的杂质。需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水。

二.PBS的制备与消毒(也可用于其它BSS,如:Hanks,D-Hanks液的配制):

1.溶解定容:将药品(NaCl 8.0g,KCl 0.2g,Na2HPO4·H2O 1.56g,KH2PO40. 2g )倒入盛有双蒸水的烧杯中,玻璃棒搅动,充分溶解,然后把溶液倒入容量瓶中准确定容至1000ml,摇匀即成新配制的PBS溶液。

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