目的利用RNAi技术特异性的抑制NF-κB亚单位p65的表达,探讨在食管鳞癌细胞中将NF-κB作为基因治疗靶点的价值。方法将荧光素标记的对照siRNA转染到食管鳞癌细胞中观察转染效率,p65siRNA转染到EC9706和Eca109细胞中,使用Western blot的方法检测p65和Cyclin D1蛋白的表达,使用EMSA法检测转染前后p65与DNA结合活性的变化;流式细胞仪检测p65siRNA与5-Fu(327μg／ml)单独或联合

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肿瘤防治研究 20 08年第 3 5卷第 9期

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sR i NA阻断 NF f—B信号通路联合 5F c - u对食管鳞癌细胞周期的影响田芳， 柴玉荣许培荣刘红涛薛乐勋，,,Ef e to i A- e a e nh b to fNF Co b n to t - n CelCy l fES f c fsRN m di td I i ii n o - KB m i a in wih 5 Fu o l c eo — CC l Li s Ce J ne TI AN n CHAIYu r n 3 XU i o g L U n a XUE - u 2 Fa g~, -o g, Pe r n a, I Ho g t o,— Le x n

1 .Dea t e t f P t0 h s lg,B s d clC l g f Z eg h u U ies y Z eg h u p r n ah p yi o y m o O ai Me i ol e o hn z o nvri, hn z o c a e t 40 5, hn,.L br tr o e ilg 3 e a t n s lg n m roo y 5 02 C a 2 aoaoyf rC l B oo y,.D p r i l met f Hioo ya dE by lg o tC r ep n n o rs o digAu h r XUE L - u E mai: ex 3 1 n t to: ex n, - lxu l@ 7 . e

A s a tO jc v R t frn e( NAi bt c: be t e r i NA i e ee c R n r )wa mpo e oihbt h x rsin o 6 n — s e l d t ii t ee p e s f 5 a d t e y n o p ov l a e t e e f cso _ B sg a ig p t wa sa t r e o e e t e a y i CC c l l e .M eh d au t h fe t f NF K i n l a h y a a g tf rg n h r p ES el i s n n n to sA lo e c i - b ld n n s e il i fu r s e n l ee o— p ca RNA s u e o mo i re f in y i 9 0 . E 7 6 a d Ec l 9 a s wa s d t n t fi e c EC 7 6 o c n C9 0 n a 0 we e ta s e td wi 0 n 6 sRNA,p 5 a d c c iD

1 p o en lv l we ed tr ie sn e tr r r n f ce t 5 M p 5 i h 6 n y l n r t i e es r e e m n d u ig W s e n B o tn . Afe r n f c e t r wih u 6 sRNA t7 , c l r e td f r n ce r a tvt f l ti g t rt a s e td wih o t o tp 5 i a 2 h e l we e t s e o u la ci i o s y

NF K sn u la x r c s b - B u ig n ce re t a t y EM S八

ES el r r a e t rwi o tp 5 i CC c l we e t e t d wi o t u 6 s s h h RNA,5 Fu o - r

c mb n t n h r o o 8h o ia i s t e e ff r4 .Th e l we e s an d wi Ia d a a y e el y l y f w y o t y o e c l r t ie t P n n lz d c l c c eb l c t me r . s h o

Reu t A lo e c i - b ld n n s e i1 i sl s f r s e n l ee o - p ca sRNA s u e o mo i re f in y i 9 0,d mo s r— u a wa s d t nt fi e c n EC 7 6 e n t a o c t g n a l 0 i e ry 9 ta se t n efce c .Th r t i e e fp 5 a d c ci D1 d c e s d a t rta se t d n r n f c i fiin y o e p o en l v l 6 n y l o n e r a e fe r n fc ewi 6 sRNA t 2h t p 5i h a .An 6 sRNA lo s p r s e h - B- 7 dp 5 i as u p e s d t e NF x DNA- id n .p 5 i b n i g 6 sRNA—r n fc e ta se t d

c l h we n ices n tep r e tg fc l nt eG1g1p a ea dad ce s ntep re tg f el s o da n ra ei h ecn a eo el i h/ h s n e ra ei h ecn a eo s sc l n t e S p a e W h l o ia i n wi -, t e r s ls we

e mo e p o ie c . Co cu in el i h h s . s i c mb n t t 5 Fu h e u t r r r m n n e e o h n ls op 5i 6 sRNA n i i h o s i t ey a t e NF J i n l g p t wa ih b t t ec n t u i l c i _ B sg ai a h y,a d d wn e u a st e e p e s n o s t v v c n n o r g l t h x r s i f o c ci D1 Th to g c n t u i eNF￣ in l g p t wa CC k sNF J a g t o h e e— yl n . es r n o s i t - B sg ai ah y i ES t v n n ma e _ B at r e rt ed v l c f o me t fn v l h r p u i sr t ge . p n o e t e a e t ta e is o c

Ke r s E o h g a s u mo s c l c r i o; - a p B; y wo d: s p a e l q a u el a cn ma NF k p a RNA t re e c; ci i e f r n e Cy l D1 n n

摘

要：目的

利用 R i术特异性的抑制 N -B亚单位 p 5的表达， NA技 F￣ 6探讨在食管鳞癌细胞中将 NF -将荧光素标记的对照 s A转染到食管鳞癌细胞中观察转染效 i RN

B作为基因治疗靶点的价值。方法

率，6 iNA转染到 E 9 0 p 5s R C 7 6和 E a0 c19细胞中，用 Wetr l的方法检测 p 5和 C cnD1白使 senbo t 6 yl 蛋 i

的表达，用 E A法检测转染前后 p 5与 D使 MS 6 NA结合活性的变化；式细胞仪检测 p 5s A与 5F 流 6 i RN一u(2 g m1单独或联合应用， 3 7t/ ) t对食管鳞癌细胞周期的影响。结果荧光素标记的 s NA转染食管鳞癌 i R

细胞的效率可达 9%以上。在转染后的 E 90 0 C 7 6和 E a0 c19细胞中，6 p 5和 C e nD蛋白的表达水平下 yl 1 i调； -B与 D NF K NA的结合活性明显下降； ( G期的细胞开始增加，时 S期的细胞逐渐减少； G/ 同当转染

p 5s NA细胞联合使用 5F 6 i R一u时，/期的细胞明显增加，时 S期的细胞明显减

少。结论 G,G同

p5 6

s N可以特异性的阻断 N -B信号通路， i A R Fx下调 N -B下游基因中细胞周期蛋白 C cnD1的表达， Fx yl i表

明活化的 NF _B信号通路可以成为食管鳞癌基因治疗中一个重要的分子靶点。 关键词：管鳞癌； _B R A tr rneC cnD食 NFK; N i ef e c; y l 1 n e i中图分类号： 7 5 1 R 3 .文献标识码： A文章编号：0087 (0 80—6 70 10—5 8 20 )90 1-4

0引言

食管鳞癌是一种侵袭性很强的肿瘤，的预后它收稿日期：0 71-2修回日期：0 8【—5 20—12; 2 0一12 )基金项目：育部“五” 1教十 2 1工程重点建设项目：瘤肿

差，临床进展迅速，伴有淋巴结转移，易复发。多且核因子 NF x Nu l r atr a p )是近年来 -B( ce co— p aB aF k

与生物工程基金资助项目(教重办Eo 2第 2 ) 2o 3号 作者单位：.40 5 1 50 2郑州大学基础医学院病理生理学教研室，.细胞生物学研究室，.基础医学院组胚教研室 2 3通信作者：乐勋，- i xex 3 1 nt薛 Emal ul@ 7 . e: 作者简介：田芳( 94)女，士，师， 17一，博讲主要从事肿瘤基因工程的研究

发现的转录调控因子，常见的形式是由 p 0和最 5

p5组成的异源二聚体， 6在绝大多数静止期的细胞中， N卜 B与其阻抑物 IB x a蛋白相结合，以非活性