广东医学

2 0 1 3年 5月第 3 4卷第 1 0期

Gu a n g d o n g Me d i c a l J o u r n a l Ma y .2 0 1 3,V o 1 .3 4,N o .1 0

l 5 l 3

H A N D 2蛋白在先天性巨结肠肠壁肌间神经丛中的表达及意义术刘鹏飞，秦克旺，吴坤河，史浩，张磊。广州医学院研究生学院(广州 5 1 0 1 8 2 );广东省妇幼保健院小儿外科，病理科(广州 5 1 0 0 1 0 )

【摘要】 目的研究 H A N D 2蛋白在先天性巨结肠症患儿肠壁肌间神经丛的表达情况，探讨 H A N D 2蛋白与先天性巨结肠发病的关系。方法应用免疫组化二步法染色检测 4 6例先天性巨结肠患儿狭窄段、移行段、扩张

段和正常段肠壁组织肌间神经丛中 H A N D 2蛋白的表达，用计算机图像分析软件 ( I m a g e P r o P l u s 6 . 0)计算 H A N D 2蛋白在先天性巨结肠各段肠壁组织肌间神经丛的免疫组化阳性染色的平均光密度值。结果 H A N D 2蛋白在先天

性巨结肠患儿正常肠壁组织的肌间神经丛有阳性表达，多呈强阳性；环形肌及纵行肌亦有表达，多呈中等强度阳性。狭窄段肌间神经丛中，未见有阳性染色的神经节细胞，可见肌间神经纤维表达呈弱阳性或阴性；在移行段与 扩张段肌间神经丛中，可见较多阳性表达肌间神经节或神经纤维。分别与移行段、扩张段及正常段比较，狭窄段的平均光密度明显降低，差异有统计学意义( P< 0 . 0 1 )。结论狭窄段肠壁肌间神经丛中 H A N D 2蛋白表达量降

低， H A N D 2蛋白表达改变可能是先天性巨结肠的发病因素之一。 【关键词】 先天性巨结肠；H A N D 2;免疫组化；肌间神经丛Th e e x pr e s s i o n a nd s i gni ic f a nc e of H AN D2 i n t he m ye nt e r i c pl e x us o f t he c ol o n i n pa t i e nt s wi t h Hi r s ch s pr u ng s

d i s e a s e . L I U

- f e i, Q I NK e—w a n g, uK u n— h e, S H I H a o, Z H A N GL e i .G r a d u a t e S c h o

o l o fG u a n g z h o u Me d i c a l

C o l l e g e,G u a n g z h o u 5 1 01 8 2,C h i n a

C o r r e s p o n d i n g a u t h o r: Q m K e—w a n g. E— ma i l: q i n k e w a n g@1 6 3 . c o n r

【 A b s t r a c t】 O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e e x p r e s s i o n o f H A N D 2 i n t h e m y e n t e r i c p l e x u s o f t h e c o l o n i n p a t i e n t sw i t h Hi r s e h s p r u n g S d i s e a s e( H D),t h u s t o s t u d y c o r r e l a t i o n b e t w e e n HA N D 2 a n d p a t h o g e n e s i s o f HD .Me t h o d s T h ea g a n g l i o n i c,t r a n s i t i o n a l,d i l a t e d a n d n o r ma l s e g me n t s f r o m t h e r e s e c t e d c o l o n s p e c i me n s o f 4 6 p a t i e n t s wi t h HD w e r e c o l l e e r e d f o r s t u d y .I mmu n o h i s t o e h e mi s t r y wa s a p p l i e d t o a s s e s s t h e p r o t e i n e x p r e s s i o n o f HAND2 .Re s u l s I t n n o ma r l s e g - me n t s,HAND 2 w a s s t r o n g p o s i t i v e i n t h e my e n t e r i c p l e x u s a n d me d i a n p o s i t i v e i n mu s c l e l a y e r s,i n c l u d i n g c i r c u l a r a n d l o n g i t u d i n a l l a y e r s . No HAND2 p o s i t i v e g a n g l i o n c e l l wa s o b s e r v e d i n t h e my e n t e r i c p l e x

u s i n a g a n g l i o n i c s e g me n t s, t h o u g h w e a k p o s i t i v e o r n e g a t i v e n e r v e i f b e r s c o u l d b e o b s e r v e d .HAN D2 p o s i t i v e my e n t e r i c p l e x u s w e r e a l s o o b s e ve r d i n t h e t r a n s i t i o n a l a n d d i l a t e d s e g me n t s .S i g n i ic f a n t r e d u c t i o n i n o p t i c a l d e n s i t y o f HAND 2 wa s r e v e a l e d i n my e n t e r i c p l e x u s

i n a g a n g l i o n i c s e g m e n t s w h e n c o mp a i r n g w i t h t h o s e i n t r a n s i t i o n a l, d i l a t e d a n d n o r m a l s e g m e n t s( P< 0 . o 1 ) .C o n c l u s i o nHAND 2 i s d o wn—r e g u l a t e d i n t h e my e n t e r i c p l e x u s o f t h e a g a n g l i o n i c s e g me n t o f HD p a t i e n t s,s u g g e s t i n g i t i s i n v o l v e d i t s p a t h o g e n e s i s .

【 K e y w o r d s】 H i r s c h s p r u n g S d i s e a s e; H A N D 2; i m m u n o h i s t o c h e m i s t r y; m y e n t e r i e p l e x u s

先天性巨结肠 ( H i r s c h s p mn g S d i s e a s e, H D)又称无神经节细胞症，是由肠神经系统 ( e n t e r i c n e r v o u s s y s— t e n, r E N S )发育异常所致的一种先天性肠道疾病。H D 以胃肠道黏膜下和肌问神经丛的神经节细胞的缺失为

甚少，国外学者多在心脏、肢体发育以及 E N S中研究 H A N D 2的作用，很少 H A N D 2与 H D的研究报道。本研究从前期研

究结果中选取 H A N D 2基因，利用免疫组织化学方法来观察 H A N D 2蛋白在 H D肠壁肌间神经丛的表达情况，初步探讨 H A N D 2蛋白在 H D中的作用。 1资料与方法 1 . 1一般资料收集 2 0 0 9年 4月至 2 0 1 2年 9月在广

特征。临床上，根据无神经节细胞肠管长度的不同，可分为短段型、长段型及全结肠型，短段型更为常见。 H D的亚洲发病率最高，约为 2 . 8: 1 0 0 0 0…。近年来，

H D的病因和发病机制的研究主要集中在 E N S的发育

东省妇幼保健院i] ', J I Ab科经手术治疗的患儿手术标本

异常方面。我们前期利用全人类基因组表达谱芯片技术检测出 H D差异性表达基因，其中 H A N D 2基因表达下调，并经 R T—P C R验证。目前国内 H A N D 2的研究}广东省自然科学基金面上项目(编号：￥ 2 0 1 2 0 1 0 0 0 8 9 4 7 ) ▲在读硕士研究生

4 6例，所有患儿术后均经病理证实为 H D,手术标本分为狭窄段、移行段、扩张段及正常段组织。其中男 3 9

例，女 7例，年龄 1周至 3岁；新生儿 8例， 1~1 2个月3 3例， l 3~ 2 3个月 5例。短段型 3 4例，长段型 7例，全

结肠型 5例，均为散发病例，无合并其他主要脏器的先天性畸形或综合征。所有患儿家长均签署“知情同意

△通信作者。E— m a i l: q i n k e w a n g@1 6 3 . C O l l l