中国病原生物学杂志

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ｒｎａｌｈｏｅｎ　ｌｏＪｏｕｏＰａｔＢｉｏ　ｇｇｙｆ　

２０１４年１２月　第９卷第１２期

Ｄｅｃｅｍｂｅｒ２０１４，Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．１２　

：／ＤＯＩ１．ｃｂ．１４１２１７０．１３３５０ｊｊｐ

·临床研究·

王艳萍１＊，姬林松１，倪猛１，王冲２，刘怀鄂３

胆道感染产ＥＬｓ大肠埃希菌耐药和流行情况研究ＳＢ

（南阳市宛城区疾控中心，河南南阳４河南省南阳市中心医院，河南南阳４７３０００；２．７３０００；１．

）昆明医科大学第一附属医院传染科，云南昆明６５００３２３．

【摘要】ＳＢＬｓ大肠埃希菌耐药和流行情况。　方法　选取２００９—２０１３年南阳地区和昆明地　目的　研究胆道感染产Ｅ区分离自胆道感染患者产Ｅ采用最低抑菌浓度法做药敏试验，采用ＰＣＲ扩增分离株１ＳＢＬｓ大肠埃希菌１８２株，３种耐药头孢噻肟、头孢曲松３种药基因并对产物进行溴化乙锭染色和凝胶成像。　结果　产ＥＬｓ大肠埃希菌对哌拉西林、ＳＢ物耐药率均在８对氟喹诺酮类药物中的环丙沙星和左氧氟沙星耐药率分别为４对头霉素类０％以上，７．２５％和５６．０４％，对碳青霉烯类抗生素美罗培南和亚胺培南全部敏感。Ｐ抗生素头孢西丁耐药率为２１．４３％，ＣＲ扩增产ＥＳＢＬｓ大肠埃希占菌分离株耐药基因，有９占５占２７株检出ＴＥＭ基因，３．３０％；５２株检出Ｓ８．５７％；２１株检出ＣＨＶ基因，ＴＸ－Ｍ－１基因，占２．占０．１１．２基因占，１．３基因，７８基因，５５４％；３株检出ＣＴＸ－Ｍ－６５％；５株检出到ＣＴＸ－Ｍ－５％；１株检出ＣＴＸ－Ｍ－５％；占２占１４７株检出Ｃ８２％；３２株检出Ｃ５８％；２９株检出ＯＴＸ－Ｍ－ＴＸ－Ｍ－ＴＡＴＡ９基因，５．１４基因，７．１基因，１１株检出Ｏ－－分别占１１０基因，５和ＯＴＡ２基因。　结论　胆道感染产Ｅ５．９３％和６．０４％。未检出ＣＴＸ－Ｍ－ＳＢＬｓ大肠埃希菌耐药基－因亚型呈多样化，与近年来人员流动较大有关，哌拉西林、头孢噻肟、头孢曲松不能用于治疗产ＥＳＢＬｓ大肠埃希菌感染，碳青霉烯类抗生素可以作为一线药物用于治疗产ＥＳＢＬｓ大肠埃希菌严重感染。【关键词】ＳＢＬｓ大肠埃希菌；药敏试验；耐药基因　产Ｅ

（）【文献标识码】文章编号】中图分类号】８．２１　　　【３４２０１４１２６６７３７５２３１１２０４　Ａ　　　【　１　Ｒ－－－；（）：］［ｒｎａｌｈｏｅｎ　ｌｏ１４Ｄｅｃ９１２１１２６－１１２９．ＪｏｕｏＰａｔＢｉｏ２０　ｇｇｙ．ｆ　

ＡｎｔＥｓｃｎｂｉｔｒａｃｔｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓｉｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｔｈｅｒｅｖａｌｅｎｃｅｏｆｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉｉｌｉａｒ　　　　　　　　ｐｙ　

１１１２３

ｓｏｎｅＪＩＬｉｉＭｅＬＩＵ　ＨｉｎＷＡＮＧＹａｎｎｎＣｈｏｎｕａｉ１．ＨｅｎＰｒｏＮａｎ－ａｎ　ｖｉｎｃｅ　－ｐ　－　－　（　　ｇ，Ｎｇ，ｇ，ＷＡＮＧｇ，

ａｎｏｒ　ｔｒａｌ　ｔａｌ，Ｎｎ０００，Ｈａｎ，Ｃｎａ；ｎｃｈｅｎｔｒｉｃｔｔｅｒｅａｓｅＣｉｔＣｅｎＨｏｓｉａｎａ７３ｅｎｈｉ２．ＮａｎａＷａｎＤｉｓＣｅｎＤｉｓ　　ｙｇ　ｆｇ４ｇ　ｇ　ｙ　ｐｙｙ

ｉｌＣｏｎｔｒｏｌｉａ－ａｎｄ　ＰｒｅＮａｎａ７３ｅｎＣｈｉＤｅａｒｏＩｎｅｃＤｉｓＴｈｅＦｉｒＡ３．ｖｅｎｔｉｏｎ，ｎ０００，Ｈａｎ，ｎａ；ｔｍｅｎｔｔｉｏｕｓｅａｓｅｓ，ｓｔ　　　　　ｆｙｐｆｆｆｇ４　ｔａｌｍｉｎｉｃａｌｖｅｒｓｉｔｍｉｎ０３２，ｎａ）ｔｅｄ　ＨｏｓｉｏＫｕｎＭｅｄＵｎｉＫｕｎ５０Ｃｈｉ　　ｇ　ｙ，ｇ６ｐｆ　

】【Ｅｓｃｃｏｌｉｎｂｉｔｒａｃｔｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ．ｔｒａｃｔｔｈｅａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｔｈｅｒｅｖａｌｅｎｃｅｏｆｈｅｒｉｃｈｉａｉｌｉａｒｂｅｃｔｉｖｅｏｓｔｕｄＡｂｓ　　　　　　　　　　　　Ｏ　Ｔ　ｙｐｙｊ　　ｅｔｈｏｄｓｎｅｈｕｎｄｒｅｄａｎｄｅｉｈｔｔｒａｉｎｓｏｆｉｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａｂｉｌｉａｒｔｒａｃｔｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｎＮａｎｔｗｏｓＥ．ｃｏｌｗｅｒ　　　　Ｍ　Ｏ　　　　　　　　　　　－　　ｇｙｐｙ　ｃｔａｃｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｏｆｔｈｅ１８２ｓｔｒａｉｎｓｏｆｅｘｔｅｎｄｅｄｆｒｏｍＪｕｎｅ２００９ｔｏＤｅｃ２０１３．ＴｈｅｄｒｕａｎｄＫｕｎＭｉｎＹａｎｒｕｍｂｅｔａｔａｓｅｌ　　　　　　　　　　　　－－－ｙｇｇｇｐ　　　　ｒｏｄｍａｓＥ．ｃｏｌｓｔｒｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．ｅ（ＥＳＢＬ）ｕｃｉｎｉａｉｎｓｔｏ１２ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｗａｓｔｅｓｔｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｍｉｎｉｍｕｍｉｎｈｉｂｉｔｏｒ－　　　　　　　　　　ｐｇｙ　　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｅｎｅｓｆｒｏｍ１３ｉｓｏｌａｔｅｓｏｆＥＳＢＬＤｒｕＰＣＲ，ａｎｄｔｈｅｒｏｄｕｃｔｓｕｃｉｎｉａｉｎｓｗｅｒｅａｍｌｉｆｉｅｄｕｓｉｎｒｏｄＥ．ｃｏｌｓｔｒ　　　　　　　　　　－ｐ　ｇｇｇｐｇｐ　　　ｗｅｒｅｓｔａｉｎｅｄｗｉｔｈｅｔｈｉｄｉｕｍ－ｒｏｄｂｒｏｍｉｄｅ（ＥＢ）ａｎｄｉｍａｅｄｕｓｉｎｅｌｅｌｅｃｔｒｏｈｏｒｅｓｉｓ．ｅｓｕｌｔｓｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆＥＳＢＬｕｃｉｎ　　　－ｐ　　　　Ｒ　Ｒ　　ｇｇｇｐｇ　

ｉＰ，ＣＴＸ，ａｎｄＣＲＯｗａｓｏｖｅｒ８０％，ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｔｈｅｆｌｕｏｒｏｕｉｎｏｌｏｎｅｓＣＩＰａｎｄＬＥＶ　ｗａｓ４７．０４％ａｎｄＥ．ｃｏｌｔｏＰＩ　　　　　　　　　　　　　ｑ５６．０４％，ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｔｈｅｃｅｈａｍｃｉｎＦＯＸｗａｓ２１．４３％ａｎｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｔｈｅｃａｒｂａｅｎｅｍｓＩＭＰａｎｄＭＥＲｗａｓ０％．　　　　　　　　　　　　　　　ｐｙｐｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｅｎｅｓｗｅｒｅａｍｌｉｆｉｅｄｆｒｏｍｔｈｅ１３ｉｓｏｌａｔｅｓｏｆＥＳＢＬＤｒｕｒｏｄｕｃｉｎｉａｉｎｓ．ＮｉｎｅｔｅｎｓｔｒａｉｎｓｈａｄａｓｔｒＥ．ｃｏｌｓｅｖ　　　　　　　　　　　－ｐ　－ｇｐｇｇｙ　　，，，，（ＴＥＭｅｎｅ（５３．３０％）５２ｈａｄａｎＳＨＶｅｎｅ（２８．５７％）２１ｈａｄＣＴＸ－Ｍ－５４％）３ｈａｄＣＴＸ－Ｍ－５％）５ｈａｄ１１１．２（１．６　　　　　　ｇｇ，，，，ＣＴＸ－Ｍ－３（２．７８（０．５９（２５．１４（１７．５％）１ｈａｄＣＴＸ－Ｍ－５％）４７ｈａｄＣＴＸ－Ｍ－８２％）３２ｈａｄＣＴＸ－Ｍ－５８％）２９ｈａｄ　　　，ＯＴＡ１ｈａｄＯＴＡＮｏｎｅｏｆｔｈｅｓｔｒａｉｎｓｈａｄＣＴＸ－Ｍ－ＴＡｎｃｌｕｓｉｏｎＩｎｒｅｃｅｎｔｅａｒｓｔｈｅｓｕｂｔｅｏｆ１，ａｎｄ１１０．５ｏｒＯ２．ｏ　　　　　　　　　　　　　　Ｃ－－－ｙｙｐ，，ｄｒｕｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｅｎｅｓｈａｓｄｉｖｅｒｓｉｆｉｅｄａｎｄｔｈｉｓｄｉｖｅｒｓｉｔｉｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｌａｒｅｍｉｒａｎｔｏｕｌａｔｉｏｎ．Ｐｉｅｒａｃｉｌｌｉｎｃｅｆｏ　　　　　　　　　　　－ｇｇｙｇｇｐｐｐ　　，，ｒｏｄｉｍｅａｎｄｃｅｆｔｒｉａｘｏｎｅｃａｎｎｏｔｂｅｕｓｅｄｔｏｃｌｉｎｉｃａｌｌｔｒｅａｔａｔｉｅｎｔｓｉｎｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈＥＳＢＬｕｃｉｎｉａｒｂａｅｎｅｍｔａｘＥ．ｃｏｌａｎｄｃ　　　　　　　　　　－ｐ　ｙｐｇｐ　　ｅｄｒｕｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｓｅｖｅｒｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈＥＳＢＬｕｃｉｎｉａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｃａｎｂｅｕｓｅｄａｓａｆｉｒｓｔｒｏｄｌｉｎＥ．ｃｏｌ．　　　　　　　　　　　　　　－－ｐｇｇ　　【】；ＫｒｏｄＥｓｃｃｏｌｄｒｕｓｒｄｓＳＢＬｕｃｉｎｈｅｒｉｃｈｉａｉ；ｅｎｓｉｔｉｖｉｔｔｅｓｔｄｒｕｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｅｎｅｓｅｗｏ－ｐ　　Ｅ　ｇｇｙｇｇｙ　　　　　

＊

胆道感染是一种常见外科疾病，它与胆囊结石引起肠埃希菌的致病物质有血浆凝固酶，根据其致病性的

１］

。肠道感染在手术治的胆管梗阻以及胆汁淤积有关［

疗中需要抗菌治疗，因此需要了解胆道感染常见病原

２］

。大肠埃希菌是胆道感染的常见病原菌，菌［该细菌

，】通讯作者（女，湖北人，硕士研究生，简介）７－）１９７＊【　王艳萍（

主治医师。研究方向：消化内科。：ｗａｉｌｉｎ１９７７０６＠１６３．ｃｏｍＥ－ｍｙｐｇ

周身鞭毛，的直径为０．能运动，无芽。大５μｍ，５～１．

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ｒｎａｌｈｏｅｎ　ｌｏＪｏｕｏＰａｔＢｉｏ　ｇｇｙｆ　

２０１４年１２月　第９卷第１２期

Ｄｅｃｅｍｂｅｒ２０１４，Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．１２　

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不同，大肠埃希菌被分为产肠毒素性大肠埃希菌、肠道侵袭性大肠埃希菌、肠道致病性大肠埃希菌、肠集聚性

３］

。近黏附性大肠埃希菌和肠出血性大肠埃希菌５种［

埃希菌的最低抑菌浓度，结果判读按ＣＩ２０１３要求ＬＳ　进行。药敏试验结果用ＷＨＯＮＥＴ５．６软件进行分析　处理。

Ｌｓ大肠埃希菌确证试验　根据ＳＢ２．３　胆道产Ｅ药敏板上Ｉ２０１３年推荐的方法及判读标准进行，ＣＬＳ　

）／，（和Ｃ０μＡＺ／ＣＬＡＶ（３０μ１０μＣＴＸ（３０ＣＡＺ３ｇｇｇ））／）和ＣＴＸ／ＣＬＡＶ（３０μ１０μ４组药敏纸片中的ｇｇｇμ

任一组抑菌圈直径相差值≥５ｍｍ时为ＥＳＢＬｓ阳性。２．４　ＰＣＲ扩增耐药基因

００μｌ蛋白酶Ｋ溶液置入０．５２．４．１　ＤＮＡ提取　取２然后挑取菌落置入溶液中。将离心管置ｌ离心管内，ｍ

，／以１于５５ｈ，９５℃水浴１５ｍｉｎ２０００ｒｍｉｎ０℃水浴２．　（离心半径８．离心１ｍ取上清，烘干后置于－ｍ）ｉｎ，７ｃ２０℃保存。

２．４．２　引物设计　根据ＧＢａｎｋ提供的各型ＥＬｓｅｎＳＢ基因序列设计引物，引物信息见表１。

２＋

）：上、２．４．３　ＰＣＲ反应　反应体系（５０μｌ４μｌＭ　ｇ，

年来，随着抗生素的广泛使用和侵入式操作不断增多，

４］

。本研究导致大肠埃希菌对常见抗生素耐药率上升［

收集南阳市中心医院和昆明医科大学第一附属医院胆采用道感染患者胆汁中分离的１８２株大肠埃希菌，）进对超广谱βＬｓＰＣＲ扩增耐药基因，ＥＳＢ－内酰胺酶（

行筛选，并采用最低抑菌浓度（法进行药敏实验，ＭＩＣ）以期了解其耐药性及流行情况。

材料和方法

１　材料

分１．１　菌株　表型产ＥＬｓ大肠埃希菌共１ＳＢ８２株，离自南阳地区和昆明地区２９年１月—２０１３年１２００。质控产月胆道感染患者胆汁（剔除同一患者重复株）Ｌｓ大肠埃希菌ＡＴＣ２５９２２和ＡＴＣＣ３５２１８由昆ＥＳＢＣ

明医科大学提供，来源具有一定的可靠性；产酶标准菌、Ｃ、Ｃ、株Ｔ１ＴＸ－Ｍ－２ＴＸ－Ｍ－３ＨＶ、ＣＴＸ－Ｍ－ＥＭ、Ｓ

、、、、ＣＴＸ－Ｍ－５ＣＴＸ－Ｍ－８ＣＴＸ－Ｍ－９ＣＴＸ－Ｍ－１４ＣＴＸ－Ｍ－

１５、ＯＴＡ１、ＯＴＡ２和ＯＴＡ１０由昆明市疾控中心中－－－提供。

，哌拉西林／１．２　抗菌药物及试剂　哌拉西林（ＰＩＰ）

，，，头孢噻肟（头孢曲松（他唑巴坦（ＣＴＸ）ＣＲＯ）ＴＺＰ），，头孢哌酮／舒巴坦（头孢吡肟头孢他啶（ＣＡＺ）ＣＦＳ），，，（阿米卡星（左氧氟沙星（环丙ＦＥＰ）ＡＭＫ）ＬＶＸ），，，沙星（亚胺培南（美洛培南（头孢ＣＩＰ）ＩＭＰ）ＭＥＲ），，，头孢噻肟（头孢他啶（头西丁钠（ＦＯＸ）ＣＴＸ）ＣＡＺ）／孢噻肟／克拉维酸（和头孢他啶／克拉维ＬＡＶ）ＣＴＸＣ／均购于中国药品生物制品检定所；酸（ＬＡＶ）ＣＡＺＣＩＤ公司，ＥｘＴａＤＮＡ聚合ＭＨ培养基购于英国ＯＸＯｑ

，，酶，ｄＮＴＰ　ＭｉｘｔｕｒｅＴａＢｕｆｆｅｒ６×ＬｏａｄｉｎＢｕｆｆｅｒ和ｑｇ　

ＤＮＡ　Ｍａｒｋｅｒ为自美国Ｉｉｔｒｏｅｎ公司生产。ｎｖｇ９６ｐｌｕｉｃｒｏＳｃａｎ　ＷａｌｋＡＷａｓ微生物１．３　仪器　Ｍ－　ｙ鉴定／药敏测试系统为美国Ｓ电泳仪ｍｅｎｓ公司生产；ｉｅ为瑞典ＡｍｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ公司生产；ｅＤＮＡ扩增　　仪为德国Ｂ多点接种仪为英国ｍｅｔｒａ公司生产；ｉｏ　

凝胶成像分析系统为ａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎＡＱＳ　Ｍｇ公司生产；上海天能科技有限公司生产；９１６２型电热恒温ＤＮＰ－培养箱为上海精宏实验设备有限公司生产。

２　方法

２．１　菌株分离与鉴定　按常规方法处理临床采集的胆汁标本分别进行细菌的分离、培养和纯化，采用细菌鉴定仪ＡＴＸＰＲＥＳＳ对细菌鉴定到种。Ｂ、Ｅ

２．２　药敏试验和酶抑制剂增强试验　采用微量稀释法测定１Ｌｓ临床分离大肠２种抗菌药物对胆道产ＥＳＢ

，，下游引物各２μＣＲＢｕｆｆｅｒ４μｌＤＮＡ模ｌ５μｌ１０×Ｐ　　　

。板，用纯水补足至５５μｌｄＮＴＰ，０μｌ　

表１　耐药基因引物序列

ｌｅ１　ＳｅｕｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｅｎｅｒｉｍｅｒＴａｂ　　　　　　ｑｇｐ

目标基因

ｔＧｅｎｅＴａｒｅ　ｇＴＥＭＳＨＶＣＴＸ－Ｍ－１ＣＴＸ－Ｍ－２ＣＴＸ－Ｍ－３ＣＴＸ－Ｍ－５ＣＴＸ－Ｍ－８ＣＴＸ－Ｍ－９ＣＴＸ－Ｍ－１４ＯＴＡ－１ＯＴＡ－２ＯＴＡ－１０

）引物序列（３５＇＇－

ｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅｒｉｍｅｒＳｅｕ　　　ｐｑ

Ｆ：ＡＴＡＡＡＡＴＴＣＴＴＧＡＡＧＡＣＡＴＴ

：ＲＴＴＡＣＣＡＡＴＧＣＴＴＡＡＴＣＡＴＧＧＣＦ：ＡＴＧＣＧＴＴＡＴＡＴＴＣＧＣＣＴＧＴＧ：ＲＧＴＴＡＧＣＧＴＴＧＣＣＡＧＴＧＣＴＣＧＦ：ＡＧＴＧＣＡＡＣＧＧＡＴＧＡＴＧＴＣＡＡＴＧ：ＲＴＡＡＧＧＣＴＧＧＧＴＡＡＡＡＴＡＧＧＴＣＦ：ＡＣＣＴＡＣＣＣＣＴＧＣＴＡＴＴＡＣＣＧＡＧ：ＲＣＡＧＡＡＡＣＣＧＴＧＧＧＴＴＡＣＧＡＡＴＡＴＧＴＦ：ＡＣＣＴＧＴＴＧＴＴＡＧＧＡＡＧＴＧＡＡＣＣＧＧＲ：ＴＴＧＡＧＧＣＴＧＧＧＴＧＡＡＧＴＴＧＴＡＧＡＦ：ＡＧＴＧＡＴＣＡＣＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＣＡＴＴＧＲ：ＴＡＣＣＧＡＣＴＧＴＴＴＣＣＧＴＧＴＡＣＣＴＴＦ：ＡＣＣＣＡＧＣＣＡＣＡＣＧＧＡＴＴＣＡＴＴＴＧＲ：ＴＡＣＡＣＴＧＧＣＧＴＣＡＣＧＡＣＧＡＣＴＦ：ＧＴＴＡＣＣＡＣＡＣＴＴＣＧＧＣＧＡＴＧＡＴＴＲ：ＧＣＧＡＡＣＧＴＧＡＣＡＡＡＧＡＧＡＧＴＧＣＡＡＣＡＡＣＡＴＧＣＡＴＴＧＡＡＡＧＧＴＧＧＴＦ：ＧＴＴＲ：ＧＣＣＴＡＴＧＡＡＧＡＡＧＧＴＧＴＴＧＣＴＡＧＦ：ＣＣＡＡＧＴＣＴＧＴＴＧＡＣＡＴＧＧＴＴＧＧＲ：ＣＴＴＧＧＣＴＴＴＡＴＧＣＴＧＡＴＴＡＧＣＦ：ＣＡＧＧＣＡＡＧＣＴＧＴＴＣＧＴＧＡＴＧＡＧＲ：ＣＴＴＧＣＣＴＣＴＡＣＣＣＴＡＡＴＧＧＣＴＡＣＴＴＣＡＡＧＴＡＣＧＣＴＴＡＣＴＧＣＦ：ＧＴＲ：ＧＡＴＴＴＴＣＴＴＡＧＣＧＧＣＡＡＣＴＴＡ

产物预期长度（ｂｐ）

ｔｈｄｕｃｔｌｅｎＰｒｏ　ｇ

９３５５６１７４５８３５７６８８１９５６６６７８１１８２５２５３１０７９０

ＥＭ基因扩增反应：ｎ；９５℃变９４℃预变性５ｍｉ　　Ｔ

，，性４共３５ｓ５３℃退火４０ｓ７２℃延伸１ｍｉｎ，０个循环；７２℃延伸８ｍｉｎ。ＳＨＶ基因扩增反应：９４℃预变；，，性５ｍｉｎ９５℃变性４５ｓ６１℃退火４０ｓ７２℃延伸１

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２０１４年１２月　第９卷第１２期

Ｄｅｃｅｍｂｅｒ２０１４，Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．１２　

共３ｍｉｎ，０个循环；ｉｎ。ＣＴＸ－Ｍ基因扩７２℃延伸８ｍ

；，增反应：ｎ９５℃变性４５ｓ５８℃退火ｉ９４℃预变性５ｍ，，共３０个循环；４０ｓ７２℃延伸１ｍｉｎ７ｉｎ。２℃延伸８ｍ

通过ＰＣＲ产物经１．Ｂ染色，５％琼脂糖电泳和Ｅ凝胶成像系统摄像后进行比对分析。

［］

菌，占引起胆道感染病原菌总量的３０％以上６。大肠

埃希菌是肠道内的正常菌群，在正常情况下不致病，属于机会致病菌。它所引起的感染通常是由原发性疾病

７］

。近或有侵入性医疗操作引起的，属于继发性感染［

年来大肠埃希菌的耐药性呈明显上升趋势，这与该菌相关。产Ｅ产ＥＬｓ和头孢菌素酶（Ｌｓ菌ＳＢＳＢＡｍＣ）ｐ对头孢霉素、氨基苷类和喹诺酮类等交叉耐药，对碳青霉烯类和头霉素类敏感。ＡｍＣ酶主要是由肠杆菌等ｐ

［８］

产生的一类β－内酰胺酶能够水解头孢菌素等。本研

结　果

１　胆道分离株产ＥＬｓ大肠埃希菌的耐药性ＳＢ

药敏试验结果见表２。胆道分离的１Ｓ８２株产Ｅ－头孢噻肟、头孢曲松耐药ＢＬｓ大肠埃希菌对哌拉西林、

对美罗培南和亚胺培南耐率比较高，均在８０％以上，药率为０，对于头孢哌酮－舒巴坦、头孢西丁等也较敏感。对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率分别为２５％和５６．０４％。４７．

表２　产ＥＳＢＬｓ大肠埃希菌对１２种抗菌药物的药敏试验结果

ｂｌｅ２　Ｔｈｅｄｒｕｓｅｎｓｉｔｉｖｅｔｅｓｔｒｅｓｕｌｔｓｏｆ１２ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＴａ　　　　　　ｇ　

ｔｏＥＳＢＬｓｒｏｄｕｃｉｎＥ．ｃｉｏｌ　　ｐｇ　

抗生素

ｒｕＤｇ

哌拉西林ＰＩＰ　哌拉西林／他唑巴坦ＴＺＰ　环丙沙星ＣＩＰ　左氧氟沙星ＬＥＶ　头孢曲松ＣＲＯ　头孢他啶ＣＡＺ　头孢噻肟ＣＴＸ　头孢西丁ＦＯＸ　阿米卡星ＡＭＫ　氨曲南ＡＴＭ　亚胺培南ＩＭＰ　美洛培南ＭＥＲ　

敏感

Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ株数百分率（％）

ｅＮｏ．Ｐｃｅｎｔａｅｒｇ５３　３２１　４９　８７　２２　１６　１２　４２１　２６１　５８　８２１　８２１　

１９．２３　７２．５３　５１．６５　４２．８６　１２．０９　３３．５２　１１．５４　７８．０２　６９．２３　４６．７０　１００．００　１００．００　

中介

Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｒｙ株数百分率（％）

ｅｃｅｎｔａｅｒＮｏ．Ｐｇ１　３　２　２　３　５　０　１　２　３　０．００　０．００　

０．５５　１．６５　１．１０　１．１０　１．６５　２．７５　０．００　０．５５　１．１０　１．６５　０．００　０．００　

株数

Ｎｏ．１４６　４７　８６　１０２　１５７　１１６　１６１　３９　５４　９４　０．００　０．００　耐药

Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ百分率（％）

ｅＰｃｅｎｔａｅｒｇ８０．２２２５．８２４７．２５５６．０４８６．２６６３．７４８８．４６２１．４３２９．６７５１．６５０．０００．００

究中产Ｅ头孢噻肟、头Ｌｓ大肠埃希菌对哌拉西林、ＳＢ对头孢哌酮－舒巴坦、孢曲松耐药率均超过８头０％，孢西丁等药物较敏感，对美罗培南和亚胺培南全部敏感。细菌对头孢曲松，头孢他啶，头孢噻肟和氨曲南等耐药程度较高主要与长期使用酶抑制剂有关。多数患者入院前曾在社区诊所治疗时使用过广谱类抗生素，使产Ｅ哌拉西林、头孢噻Ｌｓ株筛出率增加。因此，ＳＢ肟和头孢曲松已不能作为本地区一线药物临床治疗大肠埃希菌引起的胆道感染

。

０）ＤＬ２００Ｍ　ＤＮＡ分子标志物（　Ｐ　阳性对照　Ｎ　阴性对照　　

ＣＲ产物ＥＭ基因Ｐ　１～８　分别为１～８号大肠埃希菌Ｔ

图１　ＴＥＭ基因ＰＣＲ产物电泳图００ＤＮＡ　ｍａｒｋｅｒｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌＮ　ＮｅａｔｉｖｅｃｏｎＬ２０Ｍ　Ｄ　Ｐ　Ｐ　　　　－ｇ

ｔｒｏ８Ｅ．ｃｏｌ１ｌ１－８Ｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌｉ　　ｐｙ　－　

ＦｌｅｃｔｒｏｈｏｒｅｓｉｓｏｆＴＥＭｅｎｅａｍｌｉｆｉｅｄｂＰＣ

Ｒｉ．１　Ｅ　　　　　ｐｇｐｙｇ　

２　主要耐药基因检测结果

ＳＢＬｓ大肠埃希菌中９１８２株产Ｅ７株检出ＴＥＭ

基因，占５３．３０％；５２株检测出ＳＨＶ基因，占占１１基因，１．２８．５７％；２１株检出Ｃ５４％；３株ＴＸ－Ｍ－

占１．检出Ｃ２基因，６３ＴＸ－Ｍ－５％；５株检出ＣＴＸ－Ｍ－基因，占２．占０．７８基因，５５％；１株检出Ｃ５％；ＴＸ－Ｍ－占２９基因，５．４７株检出Ｃ８２％；３２株检出ＴＸ－Ｍ－占１１４基因，７．１基因，Ｃ５８％；２９株检出ＯＴＸ－Ｍ－ＴＡ－分别占１１１株检出Ｏ１０基因，９３％和６．０４％。ＴＡ５．－

未检出Ｃ５和ＯＴＡ２基因。图１为ＴＥＭ基因ＴＸ－Ｍ－－图２为ＳＰＣＲ产物，ＨＶ基因ＰＣＲ产物。

Ｍ　ＤＮＡ分子标志物（０）ＤＬ２００　Ｐ　阳性对照　Ｎ　阴性对照　　

ＣＲ产物ＨＶ基因Ｐ　１－８　分别为１～８号大肠埃希菌Ｓ

图２　Ｓ基因产物电泳图ＨＶＰＣＲ００ＤＮＡ　ｍａｒｋｅｒ　Ｐ　ＰｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｅａｔｉｖｅＭ　ＤＬ２０　　Ｎ　Ｎ　ｇ

８Ｅ．ｃｏｌｃｏｎｔｒｏｌｅｓｅｃｔｉｖｅｌ１ｉ　－　１－８　Ｒｐｙ　

ｌｅｃｔｒｏｈｏｒｅｓｉｓｏｆＳＨＶｅｎｅａｍｌｉｆｉｅｄｂＰＣＲＦｉ．２　Ｅ　　　　　ｐｇｐｙｇ　

这与ＥＳＢＬｓ的基因型在不同区域存在一定差异，

９］

。不同国家和地区的抗生素应用情况有着一定关系［如ＴＥＳＢＬｓ的基因种类较多，ＨＶ、ＣＴＸ－Ｍ和ＥＭ、Ｓ

［０］

、、。在美国以ＴＯＴＡ等基因１１０ＴＥＭ－１２ＴＥＭ－ＥＭ－

［１］

，英国以Ｔ２６和ＣＴ１５等为主１１０和Ｘ－Ｍ－ＥＭ－

法国以Ｔ１２为主，３和ＳＨＶ３、ＳＨＶ４为ＴＥＭ－ＥＭ－－－

讨　论

胆道细菌感染是常见疾病，依据发病部位可以分为胆囊炎和胆管炎。引起胆的感染的细菌多直接或间接来自于肠道，因此胆汁内菌群与肠道内菌群有着密

５］

。大肠埃希菌是腹腔与胆道感染常见病原切联系［

韩国则以Ｓ主，西班牙以Ｃ９为主，１２和ＴＸ－Ｍ－ＨＶ－

、３为主。国内报道以Ｃ３ＣＴＸ－Ｍ－９和ＣＴＸ－Ｍ－ＴＸ－Ｍ－

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ｒｎａｌｈｏｅｎ　ｌｏＪｏｕｏＰａｔＢｉｏ　ｇｇｙｆ　

２０１４年１２月　第９卷第１２期

Ｄｅｃｅｍｂｅｒ２０１４，Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．１２　

·１１２９·

［］：２ｈｎＳ，ＬｅｅＹＳ，Ｌｉｍ　ＫＳ，ｅｔａｌ．Ｍａｌｉｎａｎｔｂｉｌｉａｒｏｂｓｔｒｕｃｔｉｏｎｓ　Ａ　　　　ｇｙ　

ｃａｎｗｅｒｅｄｉｃｔｉｍｍｅｄｉａｔｅｏｓｔｒｏｃｅｄｕｒａｌｃｈｏｌａｎｉｔｉｓａｆｔｅｒｅｒｃｕｔａ－　　　　　　　ｐｐｐｇｐ］，：ｎｕｓｂｉｌｉａｒｄｒａｉｎａｅ［Ｊ．ＳｕｏｒｔＣａｒｅＣａｎｃｅｒ２０１３，２１（８）ｅｏ　　　ｙｇｐｐ　２３２１－６．

［］６ａ３ｉｓａｋａｚｕＹ，ＭｉｈｏＯ，ＳｈｉｒｏＥ，ｅｔａｌ．ＨｉｈｆｒｅｕｅｎｃｏｆＩＭＰ－－　Ｈ　　　　　　ｇｑｙ　

ｍｌＥｒｏｄｌｉｎｉｃａｌｉｓｏｌａｔｅｓｏｆＭｅｔａｌｌｏｔａｍａｓｅｕｃｉｎｈｅｒｉｃｈ－ｏｎｃａｃｓｃ－－－　　　ｐｇｇ　　β

［］，（）：ｉａｃｏｌｉｎＪａａｉｎＪ．ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂＡｅｎｔｓＣｈｅｍｏｔｈｅｒ２０１２，５６８　　　　　ｐｇ４５５４－５．

［］４２６株大肠埃希菌感染的临床分１５　胡志军，潘晓龙，周东升，等．

（）：］布及耐药性监测［４，１８２２５７－６０．Ｊ．安徽医药，２０１［］０９～２０１３年齐齐哈尔市粪肠球菌基５２０　张慧宇，张博，宫健，等．

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［］６ｅｃｋｅｒＢＡ，ＣｈｉｎＥ，ＭｅｒｖｉｓＥ，ｅｔａｌ．Ｅｍｅｒｅｎｃｂｉｌｉａｒｓｏｎｏｒａ　Ｂ　　　　　－ｇｙｙｇ　　

ｈｕｔｉｌｉｔｏｆｃｏｍｍｏｎｂｉｌｅｄｕｃｔｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｉｎｔｈｅｄｉａｎｏｓｉｓｏｆ　　　　　　　　ｐｙ：ｙｇ　　］，ｃｈｏｌｅｃｓｔｉｔｉｓａｎｄｃｈｏｌｅｄｏｃｈｏｌｉｔｈｉａｓｉｓ［Ｊ．ＪＥｍｅｒＭｅｄ２０１４，４６　　　ｙｇ　（）：１５４－６０．

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］和阴沟肠杆菌中的检出及耐药情况分析［Ｊ．中国病原生物学杂（）：志，３，８７６４９－５１．２０１

［］８ａｚｕｍａＳ，ＩａｒａｓｈｉＹ，ＩｎｕｉＫ，ｅｔａｌ．Ｃｌｉｎｉｃａｌｅｆｆｉｃａｃｏｆｉ．ｖ．　Ｔ　　　　　　ｇｙ　

ｄｏｒｉｅｎｅｍ，ａｎｅｗｃｌａｓｓｏｆｃａｒｂａｅｎｅｍ，ｉｎａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｂｉｌｉａｒ　　　　　　　ｐｐｐｙ：Ａ　［］，ｔｒａｃｔｉｎｆｅｃｔｉｏｎｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒｔｒｉａｌＪ．ＨｅａｔｏｌＲｅｓ２０１１，４１　　　ｐ（）：４３４０－９．

［］９Ｓ，ｅｔａｌ．ＶｉｒｕｌｅｎｃｅｆａｃｔｏｒｓａｎｄｄｒｕｈａｒｍａＳ，ＢｈａｔＧＫ，Ｓｈｅｎｏ　Ｓ　　　　　　ｇｙ　

ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｅｒｉｃｈｉａｉｌａｔｅｆｒｏｍｅｘｔｒａｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓＥｃｈｃｏｌｉｓｏ　　　　　　　［］，（）：Ｊ．ＩｎｄｉａｎＪＭｉｃｒｏｂｉｏｌ２００７，２５４３６９－７３．　　

［］，ｔｅｂｅｌａｃ１０ａｎＪＪＴｓａｉＳＨ，ＣｈｕａｎＣＬ，ｅｔａｌ．ＯＸＡｔａｔａｍａｓｅｓ－－　　　Ｙ　　ｙｐｇ　

ｅｘｔｅｎｄｅｄａｍｏｎｒｕｍｃｅｈａｌｏｓｏｒｉｎｉｓｔｅｎｔｒｄｏｍｏｎａｓｓｅｃｔｒｅｓｓｅ　　Ｐ－－ｇｐｐｐ　［］ａｅｒｕｉｎｏｓａｉｈｏｓｉｔａｌｉｎｓｏｕｔｈｅｒＴａｉｗａｎＪ．ｌａｔｅｓｉｎａｕｎｉｖｅｒｃｉｔｓｏ　　　　　　ｐｙｇ　，ＪＭｉｃｒｏｂｉｏｌＩｍｍｕｎｏｌＩｎｆｅｃｔ２００６，３９：１３０－４．　　　

［］，１１ａｎＫａｒｉｓｉｋＥ，ＥｌｌｉｎｔｏｎＭＪＰｉｋｅＲ，ｅｔａｌ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｅｘｒｅｓ　Ｙ　　　　　　－ｇｐ

ｓ１ｌＥｃｎｏｆＣＴＸ－Ｍ－ｔａｍａｓｅｂｅｔｗｅｅｎｔｗｏｍａｏｒｈｅｒｉｃｈｉａｉｏ５ａｃｓｃｏ－－－　　　　　　　ｊβ］ｌｉｓｔｒａｉｎｓｒｅｓｏｎｓｉｂｌｅｆｏｒｏｕｔｂｒｅａｋｓｉｎｔｈｅＵＫ［Ｊ．ＣｌｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ　　　　　　　　ｐ，（）：ＩｎｆｅｃｔＤｉｓ２００６，１６４１－４．　

［］１２Ａ，ＢｕｌｄａｋＬ，ｅｔａｌ．ＢｉｌｅｂａｃｔｅｒｉａｌｆｌｏｒａａｎｄｉｔｓａｒｅｌＥ，Ｍａｄｅ　Ｋ　　　　　　　ｐｊ　

ｉｎｖｉｔｒｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｔｔｅｒｎｉｎａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａｃｕｔｅｃｈｏｌａｎｉｔｉｓｒｅｓｕｌ　　　　　　　　　－ｐｐｇ［］，ｒｏｍｃｈｏｌｅｄｏｃｈｏｌｉｔｈｉａｓｉｓＪ．ＳｃａｎｄＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ２０１１，４６ｔｉｎｆ　　　ｇ　（）：７－８９２５－３０．

［］１３ｔｉａＡ，ＲａｉａｎｉＴ，ＰａｔｅｌＰ，ｅｔａｌ．Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｅｒｆｒｉｎｅｎｓｂａｃ－　Ａ　　　　　　ｙｐｇ

ｅｍｉａｃａｕｓｅｄｂｃｈｏｌｅｄｏｃｈｏｌｉｔｈｉａｓｉｓｉｎｔｈｅａｂｓｅｎｃｅｏｆａｌｌｂｌａｄｄｅｒｔｅｒ　　　　　　　ｙｇ　

、ＣＴＸ－Ｍ－１４为主，ＣＴＸ－Ｍ－２ＣＴＸ－Ｍ－５和ＣＴＸ－Ｍ－８

报道较少。ＴＴＡ等亚型较ＨＶ，ＣＴＸ－Ｍ和ＯＥＭ，Ｓ多，由ＴＴＡ的早期基因中的ＨＶ，ＣＴＸ－Ｍ和ＯＥＭ，Ｓ

１２］

。Ｃ一个或几个位点突变而来［ＳＢＴＸ－Ｍ型ＥＬｓ质粒对头孢噻肟和头孢曲松的水解能力较强，而ＣＴＸ－Ｍ型ＥＳＢＬｓ质粒对头孢他啶的水解能力相对较弱，

这是胆道感染大肠埃希菌头孢噻肟、头孢曲松药物耐药率较高的原因，与近年来各级医院滥用头孢噻肟和头孢曲松等第三代头孢菌素，从而导致细菌耐药基因发生位点突变有关

［１３］

。氟喹诺酮类药物由于其具有

可口服性、无肾毒性等特点曾被广泛应用于治疗病毒性感染。但是近年来大肠埃希菌对氟喹诺酮类药物耐药性呈上升趋势，这是由大肠埃希菌氨基酸位点突变

１４］

。引起的，并且导致氟喹诺酮类药物出现交叉耐药［

本组胆道感染产ＥＬｓ大肠埃希菌对环丙沙星耐药ＳＢ对左氧氟沙星耐药率为５率为４２５％，０４％。因此７．６．在治疗产ＥＬｓ大肠埃希菌感染时应谨慎选用氟喹ＳＢ诺酮类药物。氨基糖苷类药物具有肾毒性和耳毒性，因此不建议使用。本组产ＥＬｓ大肠埃希菌对碳青ＳＢ霉烯类的美罗培南和亚胺培南全部敏感，所以碳青霉烯类药物可以作为治疗产ＥＬｓ大肠埃希菌感染的ＳＢ一线药物。头孢西丁属头霉类抗生素，对革兰氏阴性菌具有较强的抗菌作用，具有更强的细胞膜穿透性，对青霉素结合蛋白具有更高的亲和力，对酶更强的稳定性，具有抗β内酰胺酶水解能力。本组产ＥＬｓ大肠ＳＢ埃希菌对头孢西丁的耐药率较低，为２４３％。１．

本研究中胆道感染产ＥＬｓ大肠埃希菌对多种ＳＢ抗生素耐药，耐药基因有较多亚型，这与南阳地区和昆明地区近年来人员的流动性有一定关系。胆道感染大肠埃希菌造成胆道感染临床常规用药可以选择β－内酰胺酶抑制剂和头霉素类抗生素等抗生素治疗，重症感染则建议使用碳青霉烯类抗生素治疗。为了减少细菌耐药性的产生，需要严格控制规范抗生素的使用，以提高抗感染治疗效果。

【参考文献】

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ｓｉｔｅｏｆｔｈｅａｌｌｂｌａｄｄｅｒａｆｆｅｃｔｓｒｅｃｏｖｅｒｏｆｂａｃｔｅｒｉｃｉａｉｎｓｍｔｏｍａｔｉｃ　　　　　　　　ｇｙｙｐ　［］，（）：ｃｈｏｌｅｌｉｔｈｉａｓｉｓＪ．ＪＧａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎＬｉｖｅｒＤｉｓ２００８，１７２１７９－　　　８２．

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［］ｃａｓｓｅｔｔｅａｒｒａｓｉｎｍｏｂｉｌｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｔｅｒｏｎｓＪ．ＦＥＭＳＭｉｃｒｏｂ　　　　　　ｙｇ，（）：Ｒｅｖ２００９３３７５７－８４．

【修回日期】收稿日期】１１２１　【１２２０４４０１０１－－－－　２　２