知识要点(专题1)1.基因工程的步骤；基本工具；限制性核酸内切酶的特异性； 黏性末端和平末端。

2.限制性核酸内切酶、 DNA连接酶和DNA聚合酶的比较； E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶的比较；3.运载体必须同时满足的五个要求 4.启动子、终止子、内含子、外显子和增强子；

5.真、原核细胞的基因结构比较6.目的基因获取方式；基因文库、基因组文库、部分基因文库

(一)基因工程的概念什么叫基因工程？

基因工程又叫基因拼接技术或DNA重 组技术。该技术是在生物体外，通过对 DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”, 对生物的基因进行改造和重新组合，然后 导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基 因在受体细胞内表达，产生出人类所需要 的基因产物。

填表 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 操作环境 操作对象 生物体外 基因

操作水平基本过程 实质 结果

DNA分子水平剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组 人类需要的基因产物

能 发 光 的 水 母

能发 荧光 的热 带斑 马鱼?

同时具有高 产、稳产和 抗逆性等优 良品质的农 作物新品种.

抗虫害的玉米

转鱼抗寒基 因的番茄

转基因鲑 鱼

基因工程的基本操作程序主要包括 四个基本步骤： 1)目的基因的获取 2)基因表达载体的构建 3)将目的基因导入受体细胞 4)目的基因的检测与鉴定 为什么需要此四个步骤？

1)目的基因的获取 符合人 们的需要，赋予一种生物新的遗传特性。 2)基因表达载体的构建 使目的基因在受体 细胞中能稳定存在，遗传及表达。 3)将目的基因导入受体细胞 目的基因只有进入受体 细胞，维持稳定和表达才 能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。

4)目的基因的检测与鉴定通过检测和鉴定才能得知目的基因是否在受体 细 胞中稳定遗传和正确表达。

基因工程培育抗虫棉的简要过程：苏云金芽孢杆菌提取

普通棉花(无抗虫特性) 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性)

抗虫基因

与运载体DNA拼接 导入

上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？

基因工程培育抗虫棉的关键步骤： 关键步骤一：抗虫基因从苏云金芽孢杆菌 细胞内提取出来 关键步骤二：抗虫基因与运载体DNA连接 关键步骤三：抗虫基因导入受体(棉花)细胞

解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？

基因的剪刀——限制性内切酶 关键步骤一的工具：基因的针线——DNA连接酶 关键步骤二的工具：

基因的运载工具——运载体 关键步骤三的工具：

(二)DNA重组技术的基本工具1. 限制性核酸内切酶——“分子手术刀”

限制酶是在生物体(主要是微生物)内的一

种 酶，能将外来的DNA切断，由于这种切割作用是 在DNA分子内部进行的，故名限制性内切酶。特点：特异性 即一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。

GAATTC EcoRI限制酶只能识别____________脱氧核苷酸序列 切点↑切点↓ SmaI限制酶只能识别_____________脱氧核苷酸序列 CCCGGG

磷酸二酯键

思考:被同一种限制酶切断的几个DNA是否 具有相同的黏性末端？

切口

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