实验八酵母菌形态观察、死活细胞的鉴别

酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别一、目的要求 1.观察酵母菌的形态及出芽生殖方式,学习区 分酵母菌死活细胞的实验方法 2.掌握酵母菌一般形态特征及其与细菌的区 别

二、基本原理酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常 见细菌大几倍甚至几十倍，大多数酵母以出芽方式进行无性 繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。 本实验是通过美蓝染液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖 方式。 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型 无色，用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈 代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的 氧化型变为无色的还原型，因此具有还原能力的酵母活细胞 是无色的而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡 蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞或活细胞进行鉴别，并可 计算其成活率。

三、器材 1.菌种：酿酒酵母培养约2d的麦芽汁斜面培养 物 2.溶液或试剂 ：0.05%和0.1%吕氏碱性美蓝染 色液,革兰染色用碘液 3.仪器或其他用具： 显微镜，载玻片，盖玻片 等

四、操作步骤1.美蓝浸片的观察 (1)在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液,然 后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在染 液中,混合均匀。 (2)用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触， 然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。 (3)将制片放置约3分钟后镜检，先用低倍镜然后 用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜 色来区别死活细胞。 (4)染色约0.5小时后再次进行观察，注意死细胞数 量是否增加。 (5)用0.05%吕氏碱性美蓝染液重复上述操作。

2.水-碘液浸片的观察 在载玻片中央加一小滴革兰染色用碘液,然 后在其上加3小滴水,取少许酵母菌苔放在水 -碘液中混匀,盖上盖玻片后镜检。

六.实验报告 1.结果 绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征。 2.思考题 (1)吕氏美蓝染液浓度和作用时间的不同,对酵 母菌死细胞数量有何影响?试分析其原因。 (2)在显微镜下酵母菌有那些突出的特征区别于 一般细菌。