TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit Ver.4.0(CodeN(5)

11.重复操作步骤10，然后从负压装置上取下Spin Column，将其安置于Collection Tube上。

12.室温12,000 rpm离心1分钟。

13.将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column膜的中央处加入30μl灭菌蒸馏水

或Elution Buffer，室温静置1分钟。

注）将灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率。

14.12,000 rpm离心1分钟洗脱DNA。

●使用例

1. 500 bp、2 kb、5 kb、10 kb的PCR片段起始量分别为3μg、3μg、2μg、2μg进行1％的琼脂糖凝胶电泳后，使用本试剂盒回收纯化各DNA片段，然后取1/10量进行琼脂糖凝胶电泳，其结果见图2，回收率高达60％以上。

1％ Agarose凝胶电泳

M1：DL2,000 DNA Marker

1：切胶回收前的500 bp的DNA片段

2：切胶回收后的500 bp的DNA片段

3：切胶回收前的2 kb的DNA片段

4：切胶回收后的2 kb的DNA片段

5：切胶回收前的5 kb的DNA片段

6：切胶回收后的5 kb的DNA片段

7：切胶回收前的10 kb的DNA片段

8：切胶回收后的10 kb的DNA片段

M2：λ–Hin d Ⅲ digest

M3：pUC119 DNA

2. 18 kb的PCR片段起始量为4 μg进行1％的琼脂糖凝胶电泳后，使用本试剂盒回收纯化DNA片段，然后取1/10量进行琼脂糖凝胶电泳，其结果见图3，回收率高达50％以上。

M 1 2 M

M：λ–Hin d Ⅲ digest

1：切胶回收前的18 kb的DNA片段

2：切胶回收后的18 kb的DNA片段

●注意事项

1.使用前请确认Buffer WB中是否加入指定体积的乙醇。

2.切胶时切忌胶块过大，应尽量减小凝胶体积，否则会影响DNA收量。

3.DNA需长期保存时，建议在Elution Buffer中保存。

4.纯化的DNA用于DNA序列分析时，最好使用灭菌水洗脱DNA。

-3-

M1 1 2 3 4 5 6 7 8 M2 M3

图2. DNA片段回收电泳图

图3. DNA片段回收电泳图