TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit Ver.4.0(CodeN(4)

3.切碎胶块。胶块切碎后可以加快操作步骤6的胶块溶解时间，提高DNA回收率。

4.称量胶块重量，计算胶块体积。计算胶块体积时，以1 mg=1μl进行计算。

5.向胶块中加入胶块溶解液Buffer GM，Buffer GM的加量如下表：

6.均匀混合后室温15-25℃溶解胶块（胶浓度较大或比较难溶

时可以在37℃加热）。此时应间断振荡混合，使胶块充分溶

解（约5～10分钟）。

注）胶块一定要充分溶解，否则将会严重影响DNA的回收

率。高浓度凝胶可以适当延长溶胶时间。

7.当凝胶完全溶解后，观察溶胶液的颜色，如果溶胶液颜色由

黄色变为橙色或粉色，向上述胶块溶解液中加入3 M醋酸钠

溶液（pH5.2）10μl，均匀混合至溶液恢复黄色。当分离小于400 bp的DNA片段时，应在此溶液中再加入终浓度为20%的异丙醇。

8.将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。

9.将上述操作步骤7的溶液转移至Spin Column中，12,000

rpm离心1分钟，弃滤液。

注）如将滤液再加入Spin Column中离心一次，可以提高DNA的回收率。

10.将700 μl的Buffer WB加入Spin Column中，室温12,000

rpm离心30秒钟，弃滤液。

注）请确认Buffer WB中已经加入了指定体积的100%乙醇。

11. 重复操作步骤10。

12. 将Spin Column安置于Collection Tube上，室温12,000 rpm

离心1分钟。

13. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin

Column膜的中央处加入30 μl灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置1分钟。

注）将灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率。

14. 室温12,000 rpm离心1分钟洗脱DNA。

如果实验室备有适合于Spin Column接口的负压装置，可从上述操作步骤7以后进行以下操作。

8.将试剂盒中的Spin Column插到负压装置的插口上。

9.将上述操作步骤7的溶液转移到Spin Column中，开启调

节负压装置，缓慢吸走Spin Column中的溶液（流速控制在1滴/秒）。

10.向Spin Column中加入700 μl的Buffer WB，吸尽

Column中溶液。

注）请确认Buffer WB中已经加入了指定体积的100%乙醇。

-2- 溶液转移至

将

新

DNA solution

图1. 操作流程简图