弹性蛋白酶产生菌的筛选及其发酵条件的初步研

弹性蛋白酶产生菌的筛选及其发酵条件的初步研究

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浙江大学学报 (农业与生命科学版) 2(:9 6,0 91 5 4 2 3 )~ 0J u n lo e in ie st ( o r a fZh ja g Un v riy Agrc i.& Li c. f S i) e

文章编号： 0 89 0 ( 0 3 0—0 90 1 0— 2 9 2 0 ) 10 5— 6

弹性蛋白酶产生菌的筛选及其发酵条件的初步研究陈启和，国庆，应龙何邬(江大学食品科学与营养系，浙江杭州 3 0 2 )浙 1 0 9

摘要：从肉联厂和屠宰场附近的土壤和污水中采集到的近 1 0个样品中，富集培养分离到 1 3株 0经 2能产生弹性蛋白酶的菌株，复初筛、筛后，离到一株产胞外弹性蛋白酶活较高且稳定的细菌，初反复分经

步鉴定属芽孢杆菌属 ( a iu p L3 .同时研究了其产酶最适条件，产酶最适碳源为葡萄糖，最适 B c lss .E ) l氮源为豆饼粉 .对碳源、源和生长因子进行了正交实验，究发现碳源对产酶的影响最大，次为氮并氮研其

源 .当葡萄糖的用量为 6、饼粉为 5、米提取液为 0 2时，具有较高的产酶水平 .最适发酵初 豆 玉 .其

始 p为 7 5,2 0mL最适摇瓶装液量为 2 .在该发酵培养基中培养， 5h时达最高的产酶水平 . H . 5 0mL 3 同时还对离心后的粗酶液进行温度和 p试验，发现该酶最适作用温度和 p分别为 5℃和 7 4 H H O .,该

酶在 4 c以下保温 3 n酶活仍较高，在 6 c以上酶活全部丧失 .在 p .~ 9 0的范围内比较稳 O 0mi O¨ H7 4 .定，而在 p 7 0以下时，活下降很快 .属离子 C 、 n、 能抑制弹性蛋白酶的活性， F”、 H .酶金 u Z A1而 e

L能激活弹性蛋白酶活性，舍剂 E TA则严重抑制弹性蛋白酶活性 . i螯 D

关

键

词：弹性蛋白酶；芽孢杆菌；筛选；鉴定；产酶条件；酶性质文献标识码：A

中图分类号： Q9 5 2 T 2.

CHEN ih Q— e。HE Gu— ig。W U n l n De r.o Fo d Sce c n u rto Zh jan ie - oqn Yig—

o g( pa t f o in ea d N ti n, ei g Unv r ist,H angzho 31 iy u 002 9,C h na) i

S r e n fea ts— r du i g sr i s a d p i a iy a u is o e me t t n c n iin . J ur a f c e nig o lsa e p o cn tan n rm rr t de n f r n a i o d t s o n lo o o

Z ein ie st ( rc& Li c. h j g Un v riy Ag i. a f S i ),2 0, 9 1 5— 4 e 0 3 2 ( ): 9 6A bs r c t a t:St ansc r i apa e ofs cr i ext a e l ar e a t e w e e i ol e f om he s la w a t bl e etng r c lul l s as r s at d r t oi nd s ewat r e s pl s ha w e e e t pr e si f t y of g am e t t r n ar he oc s ng ac or pi m e . O f hem 12 s r i s at t 3 t a n pr duc d as as o e el t e. St a n N o. r i EL 3 ih t ghe t yi d el s a e w as i entfe a Bac lu s w t he hi s— el a t s d iid s il s p.. I a dii n d ton, t he expe i r— m e alr ul s r v l d t he m osts t nt es t e ea e hatt uiabl a bon a toge s ec r nd nir n our e or e a t s o c s f l s a e pr ducton w e e i r gl os 6 uc e an s d oybe l , r pe tv y. The A N O V A e uls de ons r t d ha he uc e an four 5 es c i el r s t m tae t tw n gl os

wa ,s y e n fo s6 o b a lur5% a d c r te lur0 2,i h d t e hg e tea ts r d c in W h n n o n se p f o . t a h ih s lsa e p o u to . et niilpH he m e um a

he i ta oft di w s 7.5,and 20 m L ot n 25 L l s tw a br h i 0 m fa k i s optm a orel t s r— i lf as a e p o duc i ton. T he c t e m ant i ed m axi um l s as a tviy at ulur i an m e a t e c i t 35’ or 5 hour C f 3 s under t he optm ie i z d

c n ii n . Th l s i l tc a t iy wa h i h s t p o d to s e e a to y i c i t s t e h g e t a H7 4 a d 5℃ . Th s e z m e wa t b e o e v . n 0 i n y s s a l v rt r ge ofpH he an 7.4 9. nd el - 0 a b ow 40℃, a t nd is enz m e ac i iy w a i bie u,Zn”, A 1 y tv t s nhi t d by C

a d EDTA .Fe+a d Li we e b n fca O e z me a t iy n n + r e e i il t n y c i t . v

收稿日期：2 0— 9 1 0 20— 1

基金项目：浙江省自然科学基金资助项目 ( 0 0 4 30 2 )作者简介：陈启和 ( 9 5 )男，北黄冈人，士研究生，事微生物与发酵工程研究 17,湖博从

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浙江大学学报(农业与生命科学版)

第2卷 9

Ke y wor ds: e a t e;Bac lussp. EL3; s ee ng;i l s as il cr ni den iia i tfc ton; e a t e pr l s as oduc i ondii ton c ton;c ude re ym e nz pr ope t e r is

弹性蛋白酶 ( lsa e是一种以水解不溶 E a ts )性弹性硬蛋白 (lsi )特征的蛋白水解酶， ea t为 n 它可由动物胰脏提取或由微生物发酵制得 .目 前，弹性蛋白酶主要作为治疗高血脂症、止防

品)酪蛋白(海生化试剂公司)酸度计：,上 . P一C型，海雷磁仪器厂；7 1 HS 3上 5 Gw分光光度计，普上海分析仪

器有限公司；转式摇惠旋

床；精密恒温仪；浙江轻工业研究所； GR1— L 04 2台式高速冷冻离心机，北京医用离心 .机厂.

动脉粥样硬化的生化药物口.同时它具有广谱]蛋白水解活性，示了在食品工业中具有广阔显的应用前景和较高的商业价值 .我国该产品的

1 2培养基 .

生产是靠猪胰脏提取，由于脏器资源不足，胰弹性蛋白酶一直供不应求 .国外，用微生物发采酵技术，规模工业化生产弹性蛋白酶已取得大了巨大的进展，出现了商品化的弹性蛋白酶 .

1 2 1平板及斜面培养基 (/ . . g L)pH 7 . .0

牛肉膏

4,蛋白胨 6,酵母膏 2,Na ,琼脂 2, C15 0 12 2增殖培养基 (/ ) .. g LM gSO 4 7 2 0.1,pH 7. H O 0.

弹性蛋白 5,酵

利用微生物生产弹性蛋白酶不仅能够提供足够的治疗用药物酶，也能为开拓该酶的其它方面应用提供了充足的酶源，如肉的嫩化和动物蛋 …… 此处隐藏：9319字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……