基因工程-3.2大肠杆菌克隆载体

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第三章第二部分 大肠杆菌的克隆载体

Cloning Vectors for E. coli

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所有克隆质粒中， 所有克隆质粒中，最多的一类是以大肠杆菌为 宿主的。 宿主的。 因为： 因为： 过去50年内， 50年内 过去50年内，这种细菌在基础研究中一直扮 演着中心角色； 演着中心角色； 已积累大量有关大肠杆菌的微生物学、 已积累大量有关大肠杆菌的微生物学、生物 化学和遗传学知识； 化学和遗传学知识； 事实上所有关于基因结构和功能的基础研究 都是以大肠杆菌为材料而开展的。 都是以大肠杆菌为材料而开展的。

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3.1 基于大肠杆菌质粒的克隆载体

基因克隆领域最得到广泛应用的也是最简单的， 基因克隆领域最得到广泛应用的也是最简单的， 是那些以大肠杆菌质粒为基础而构建的克隆 载体。 载体。 可用于大肠杆菌的有很多不同的质粒载体， 可用于大肠杆菌的有很多不同的质粒载体，其 中有很大一部分是由商业公司提供的。 中有很大一部分是由商业公司提供的。他们 开发的载体既易于纯化， 开发的载体既易于纯化，又结合一些想要的 特性，如高的转化效率、 特性，如高的转化效率、方便的转化和重组 的筛选标志以及克隆相当大的DNA片段(高达 的筛选标志以及克隆相当大的DNA片段( DNA片段 8kb)的能力 的能力。 8kb)的能力。 pBR322。pBR322是最早被构建的质粒 是最早被构建的质粒， 如：pBR322。pBR322是最早被构建的质粒，至 今仍被广泛使用。 今仍被广泛使用。

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3.1.1

质粒克隆载体的命名法

“pBR322 这个名字符合载体命名法的标准规则： pBR322”这个名字符合载体命名法的标准规则 pBR322 这个名字符合载体命名法的标准规则： “p”说明它是一个质粒； 说明它是一个质粒； 说明它是一个质粒 BR"表示最初构建它的实验室(BR代表了两 表示最初构建它的实验室(BR “BR"表示最初构建它的实验室(BR代表了两 个构建人的名字：Bolivar和Rodriguez)。 个构建人的名字：Bolivar和Rodriguez)。 322"把该质粒和该实验室构建的其他质粒 “322"把该质粒和该实验室构建的其他质粒 区分开来(另外还有pBR325 pBR327， pBR325， 区分开来(另外还有pBR325，pBR327，pBR328

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pBR322的一些有用特性 3.1.2 pBR322的一些有用特性

从pBR322的遗传图谱和物理图谱(图6-1)可以看 pBR322的遗传图谱和物理图谱( 1)可以看 的遗传图谱和物理图谱 出为什么它能是一个如此受欢迎的克隆载体？ 出为什么它能是一个如此受欢迎的克隆载体？ 第一个优点在于它的大小 章里提到， 第2章里提到，作为一个克隆载体它的大小应 该小于10kb 10kb， 该小于10kb，否则在提纯它的时候很容易导 DNA断裂 断裂。 致DNA断裂。 pBR322只有 363bp， 只有4 pBR3

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