胶体金快速诊断技术在兽医临床诊断中的应用(2)

胶体金快速诊断技术在兽医临床诊断中的应用

与金标单克隆抗体结合，形成二元复合物，然后继续上升，当到达硝酸纤维素膜上的检测区时，该复合物被膜上包被的犬瘟热多克隆抗体捕获，形成“金标犬瘟热单克隆抗体/犬瘟热病毒抗原/犬瘟热多克隆抗体”三元复合物，使该区带显红色，未与犬瘟热多克隆抗体结合的二元复合物继续向上层析，当到达质控线位置时，与包被的兔抗鼠抗体结合，形成“兔抗鼠抗体/金标犬瘟热单克隆抗体/犬瘟热病毒抗原”三元复合物，使该区带同样显红色。若被检样品中不含有犬瘟热病毒抗原时，则检测线所在区没有反应发生，不会出现红色带，质控线形成“兔抗鼠抗体/金标犬瘟热单克隆抗体”二元复合物，仍出现红色。若质控线不出现红色说明该试纸条失效。

抗原，免疫动物后产生高效价的特异性抗体，纯化抗体与胶体金结合成免疫金，制备成简易的检测试纸条。免疫金试纸法对盐酸克伦特罗的最小检测量为40ng/ml，试纸条在室温保存150d不影响检测结果。实验检测86份ELISA试剂盒阴性样品和42份阳性样品，其符合率分别为100%和95.2%。

李蓓蓓[8]等采用胶体金同时标记新城疫单克隆抗体和禽流感单克隆抗体制备复合型胶体金免疫试纸条可同时检测两种病毒。试纸条检测NDV的灵敏度比HA试验结果高8倍。

3 胶体金快速诊断技术应用展望

3.1 进一步提高检测灵敏度

灵敏度的提高无疑会拓宽胶体金诊断的检测范围，而采用信号放大系统如生物素－亲和素系统或免疫金银染色法进行银加强，并结合一些相应的简单检测仪器可能是最有希望的途径之一。3.2 实现检测多元化

可采用在同一膜上作多种项目测定和多项目的组合测定2种方式。一次检测可同时得到一组结果，这对于检测某些具有联检意义的物质具有很大的应用价值。3.3 实现定量或半定量检测3.4 通用试剂的应用

在间接法检测中用胶体金标记葡萄球菌蛋白A用于各种抗体的检测，有利于减少非特异性反应，稳定检测试剂的质量。链霉亲和素固定滤膜检测带可作为通用固定受体，与各种生物素化抗体结合用于检测相应的抗原性物质。由于链霉亲和素的四价性使其固定于膜材料后，仍能对生物素化抗体保持较高的反应活性，而且两者的结合具有高度的稳定性。参考文献

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[8]李蓓蓓，薛 强，李锦丰，等. 新城疫病毒和禽流感病毒复合型胶 体金免疫层析试纸条的制备[J]. 畜牧与兽医，2009，41（8）：33- 37.

（徐爱民编，张宏民校）

2 胶体金快速诊断技术在兽医临床诊断中的应用

曹春梅[3]利用针对O9抗原的2株单克隆抗体的夹心和胶体金免疫层析试纸条巧妙的设计优势，成功建立了快速检测沙门氏菌O9抗原的新方法。测定沙门氏菌O9抗原的胶体金免疫层析条，作为一种初筛试验，其实用性在人工污染样品试验和现场检测试验中得到验证，该方法简单、快速、特异、可单份测定，除试剂外无需任何仪器设备和专门的技术人员，且试剂稳定适合大规模推广应用。

张改平[4]等以高亲和力和高特异性传染性法氏囊病毒（IBDV）单克隆抗体为基础，成功的研制出鸡传染性法氏囊病（IBD）快速诊断试纸条。试验结果表明IBD试纸与鸡的NDV、ALV、IBV、ILTV、MDV无交叉反应。IBD试纸条具有良好的特异性和敏感性，其敏感性与琼扩试验相比，则提高了32～64倍，能够识别不同的IBDV毒株包括强毒和弱毒，与ELISA的阳性符合率为100%。对于人工感染IBDV鸡，感染后36h在感染鸡的法氏囊即可检出IBDV，从检测到获得结果仅需要12min，IBD试纸具有特异、敏感、快速、简单等特点，不需要任何专业技能和其它试剂，实现了鸡病诊断的一步法。

戴荣四[5]研制的鸡新城疫胶体金免疫层析试纸条对大量鸡新城疫病例进行了测试，并与鸡新城疫的常规检验方法HA和HI试验的试验结果进行了比较，阴性符合率和阳性符合率均为100%，检测证明其既敏感又稳定，且具有特异性，保存较长时间，特性不发生改变。

王中力[6]等建立一种简便、快速、准确检测犬细小病毒（CPV）的胶体金免疫层析法。采用柠檬酸三钠法制备胶体金颗粒，标记纯化的CPV单克隆抗体，在玻璃纤维素膜上喷加纯化的CPV多克隆抗体，制成诊断CPV抗原的快速诊断试纸条。用本试验研制的CPV试纸条检测收集到的120份犬粪便样品，其结果与HA结果相比对，HA效价在1:40以上，试纸条均能检测到为阳 …… 此处隐藏：326字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……