胃泌素受体拮抗剂对胃癌细胞株MKN45 裸鼠移植瘤生长的抑制作用

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胃泌素受体拮抗剂对胃癌细胞株 MKN4 5裸鼠移植瘤生长的抑制作用-

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/ J: c一‘建立胃癌细胞株 MK￥ N4

(上海医科大学华山医院外科

探索应用胃泌素受体拮抗荆调控胃癌细胞自分泌生长的作用及其机制。方法

移植瘤的动物摸型，观察胃泌素受体拮抗剂丙各胺对移植瘤的面积、重量、胃癌细胞 DN A及血清促胃液素含量的影第 1 6天丙各胺组移植瘤面积( 1 4±l 7 m 2 6 1 85 )较对照组 ( 4 8±2 5 r明显缩小 ( 0 0 )第 9 6 8 0 )r m P< .5, 2天时差别更明显 (2 7±4 6: 2 1 5 8 15 5 0 2 ) ( 1 .9±5 . 8 0 0 )叫。第 2 8天时丙各胺组及对照组的移植瘤重量分别为 (4 .±6 . )璀及 ( l7 7±8 . )瑁 ( 879 96 f 17 . 3 5 f P<0 o ) .5。丙谷胺组胃癌细胞 D A指数、均 D A含量及 s期细胞比例 N平 N均低于对照组。丙谷胺对血清促胃液素含量没有影响。结论丙各胺对胃癌细胞株 M 5移植瘤有抑制生长的作

用；丙谷胺发挥抗肿瘤作用是通过改变胃癌细胞

代谢过程，与血清促胃液素含量的改变无关。而

美词曼兰堡！奠兰墨苎 胃至型；癌；中国图书资料分类法分类号 R 3 7 52

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I h b t r f c fGa ti c p o n i io y Efe to s rn Re e t rAnt g n s n Xe o r n p a t d a o i to n t a s l n e Ga t i nc r Ce l KN4 n Nu e M ie s rc Ca e l M s si d c

Hu n G agj n, h n ni L h qn YuF n ag u n i Z a gYa l a n, eZ u i, e( p rmet fS r ey Hm nI p tl Dea t n ug r, o t￣ i, a l dclUrvri S a g i 0 0 0)出 Mei a d esy, h n￣ 0 4 t 2

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M K 4 w setbse,n edf t f at nrcpo G N 5 a alh d a dt e gsr eetr( R)a t∞ , rgo f e o e ornpa t s i h eo a i n日 g po l i, x n t sl e n d n a n dtl ul￣rae .t to ra ul rweg t tF d sDNA n h 3 ih .tr l￣rc l a dt e￣il lv o g sr w8 n e t ae . Reel Tu z n e d f a ti l n siv i td s g sl s

r a朗 w s n Urn te￣o l d ru 6 . 1 1 . 7 lv ta h tn tecnrl ru (4 8± n r a￣& e i h tgu ego p( 1 4± 8 5 )￣l h nta i h t o p 9 .6 mi l 2 o og

2 .5 n.2 f r 6d y r lll ( 8 0 ) 1l a e 1 ast a l l P<0 0 )Tta r ca l r t l c le t .5 . mo ae bcnemuhs l r f r 8 dy t a n n i r a c l t a s r廿 e tn mae a e 2 e t e rg￣md ru h nta i h cnt1 ru 1 5 5+4 . 6 il2 S( 1 . 9 0 0 )r T m r h ol p ego pta h tnte。 t o p(2 7 0 2 )T Iv 2 1 5±5 8 r og - I T u ow i t a 8 7 9±6 . ) a d( 7 . e h w s(4 . g 9 6 rga n 11 7 7±1 3 5 rgi he rgu iego padte o t l ru — 8 .) a nt o lm d ru n h nr go pr p c o es￣ f e fe 8d y ra e t(< 0. 5) I S fu d ta p c v l atr2 a ste mln P i y 0 . tWa o n h tDNA d x, v rg i e a ea e DNA￣ n e

t n n o tns a d Sp aefat no g sr a。r d si h rgu d ru h s rci o f a t cc n e l ntepo lmieg o pweelwe h n to ei t ec nr l r u . r gu i c r o rt a h s n h o to o p P o l— g mieddr t f c es mm v l f at n d i i f t h e oae t l e sr . Cm dm ia P o lmiepa sa hbtr l e D e og i os r gu d ly n i ii yr ei t w出 n o o n h o e or n pa e a ti日 c c l KN4 1eih bt r r cs fp o lmiei y atr g teDNA f n t sl x a ntdg s c cn目 e sM r l 5 1 1 ii y p oe so r gu d sb l i h n o en m ea l m f ati g o rc sa d r trltd t tesrl l d fg sr tbi o g sr cn￣ dl n o eae o h e t e o a tl s c i m v nKe a d g s r e e t r yW c s a ti r c p o; a t g n s; g￣ i a c r n n a o it S Cc n e; p。 r m甜 e

体外实验表明，胃泌素 (at n G ) g s i, s能刺激胃泌 r素受体 (at nr e trG阳性的胃癌细胞株生 gs i e po, R) t c长，别应用多种 G拮抗剂能抑制胃癌细胞的增分 R殖… I。我们以往的工作已表明， 4 .约 7 1%的胃癌组织能表达 GR,证实 C若 R拮抗剂在体内条件下确能

抑制 G阳性胃癌细胞的生长，半数胃癌的生长 R近

可通过应用 GR拈抗剂而得到延缓。丙谷胺 ( GL) P 是目前唯一应用于临床的 GR拮抗剂，们观察我P GL对 GR阳性的胃癌细胞株裸鼠移植瘤的抑制

作用，进一步探讨其作用机制。并

胃泌素受体拮抗剂对胃癌细胞株MKN45 裸鼠移植瘤生长的抑制作用

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上海医科大学学报

19 9 9年 3月，6 2 2 ()

第1 6天始 P GL组肿瘤面积较对照组明显缩小，差

材料和方法材料 c培养箱、织培养瓶、0号套管针、 组 2

异有显著性 ( P<O 0 )第 2 5; 8天时 P GL组肿瘤面积

较对照组更小， GL对肿瘤生长的抑制作用与 5 P一 F的作用相仿。 U

微量注射器、标卡尺； OL购自 Sg游 P i ma公司，一 5氟尿嘧啶 (- U)自上海旭东海普药业有限公司； 5F购裸小鼠 ( A B/-u n )压层流柜 S F条件下饲养 B L cn/u正 P(净度 1 0级 )洁 0。

实验用药的配制对照组：甲基纤维素羧0 4g,高压蒸气消毒，无菌条件下以生理盐水 .经在 2 0ml解成 0 2%羧甲基纤维素助悬剂。治疗 0溶 .组：GL不溶于水，称取 P L 5g及羧甲基纤维 P故 G 素0 4g,高压蒸气消毒，无菌条件下逐渐加生 .经在理盐水共 2 0m1研磨成均匀的混悬液。治疗对照 0,组： -U 4 g加生理盐水 8 . 5 F 2 0r a 0 0ml无菌配制。,td t

胃癌动物模型的建立胃癌细胞株 MK N4常规传代培养，含有细胞的培养液 7 1细胞数 1×取 0 (.

图 1各组肿瘤面积随时间的变化曲线F g 1 Th u r a e . i e e r e i c n r l i et mo r a tm u r n o to,

目 17,种于裸鼠右腋背交界处、;下层内成瘤，块 0 )接皮 瘤

pGL n - a d 5 FU 0. I

反复接种 2次，面胃癌细胞株 MKN￣的动物模形 5型；雄性裸小鼠 3取 0只，~9周龄，量 2~2, 8重 0 2g随机分成 3组，每组 6只；代的肿瘤在放大镜下剪传成 2r×2r×2mm大小的立方体状瘤块，套 m r m r以

各组肿瘤的重量比较第 2 8天时各组肿瘤重量，现 P L组及 5F组肿瘤重量各为 (4 . 发 G -U 8 7 9± 6 .)rg ( 1 . 9 6 a、8 4 5±5 .)rg较对照组 ( 7 . 28 a, 11 7 7±135 8 . )mgf￣.轻， O减] P<0 0 5 .0。

管针分别接种于裸鼠右前腋背交界处皮下。 GR拮抗剂的应用各组均自瘤块接种后第 1 天开始用药。对照组：配制对照组用药，只裸鼠按每腹腔内注射羧甲基纤维素助悬剂 2 0,日 2次， 0每 共治疗 2。P 8d GL:只裸鼠腹腔内注射 P每

GL混悬液 2 0,日 2次 (当于每只裸鼠每天予 P 0每相 GL 5 0mg k )共治疗 2。 5F组：治疗对照组， 0/g, 8d - U为 每周腹腔内注射 1次，当于每只裸鼠每周予 5FJ相 - I4 5 mg/ g。 l ￣

各组裸鼠血清促胃液素含量 P L组血清 G G s含量为(8 0 4 .7±1 5) g m|与对照组 (2 6 50 p/, 5 .3±5 3 )p/接近，一 U组为 ( 2 6 . 5 g ml 5F 5 . 2±1 . 2 g 7 4/ )P

mI统计学处理无显著性差异 (, P>0 0 )表明 P .5, GL对血清 G含量变化没有影响。 s 各组胃癌 MKNI植瘤细胞 D s移 NA的变化如表 1所示，组胃癌移植瘤行 D各 NA图像分析， DNA指数 ( )平均 DNA含量在 P DI及 GL组均明显降低

( P<0 0 1,细胞比率 ( P在 P .0 ) S期 S F) GL组较对照组减少，异具有显著性 (差 P<0 0 ) 5。可见 P GL能

疗效观察

第 5天时肿瘤开始形成，游标卡用

尺测量每只裸鼠荷瘤的最长径及垂直径，天测量隔 1次； 2第 8天时裸鼠全部存活，食 1禁 2h后眼球放血，以放免法测定血清 Gs含量；出肿瘤并称重；取 肿瘤切面印片，定染色后由本校图像中心采用美固国 C 2型图像细胞仪行 DNA图像分析。 AS0 0 统计学处理各组差别用 t验。检

影响胃癌细胞 D A的合成， D A指数降低， N使 N并改变胃癌细胞的分裂周期。表 1对照组及 P GL组移檀瘤细胞 DN A的变化T b 1 T edI辨 o e ta a h口 fx no r m￣l n f g s e a t a Wi l

cn。 ac臼b DNA i e to n pGL r u s n mlr la d go p

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结各组瘤体面积大小

果从图 1可见，种后第 5接

讨

论

天已有肿瘤生长，组肿瘤面积大小相近，显著性各无差异 ( P>0 0 )表明瘤块接种后形成的肿瘤， .5。初始时肿瘤大小是一致的，瘤生长的均一性好。从肿

近年来发现消化道肽类激素在胃癌的自分泌

生长中发挥重要作用，癌细胞通过自分泌 Gs与自胃，

胃泌素受体拮抗剂对胃癌细胞株MKN45 裸鼠移植瘤生长的抑制作用

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黄广建， .等胃泌素受体拮抗荆对胃癌细胞株 MKN 5鼠穆植瘤生长的抑制作用 4棵

身或邻近胃癌细胞膜上 GR结合，断刺激胃癌细不胞增殖 J因此，们试图通过应用 G拮抗剂能。人 R

响到肿瘤细胞的分裂周期，处于分裂期的肿瘤细使胞减少。此外，些学者【.认为 P一 4 J GL是一种非特

有效地阻断 Gs的促肿瘤增殖作用。 P GL曾作为一种 GR拮抗剂，床上用于治疗胃十二指肠溃疡。临 近年人们对其抑制消化道肿瘤细胞生长的作用及机制进行了研究。体外实验表明 _, GL呈剂量依赖 3 P j性抑制 GR阳性的消化道肿瘤细胞株的生长，合符受体的饱和学说。由于在体内条件下多种消化道肽类激素存在复杂的代偿机制，不明确应用 P尚 GL在体内能否有效地抑制肿瘤细胞的增殖。本研究结果 证实 P GL在活体内能抑制胃癌 M K 5植瘤的生 N4移长，瘤面积较对照组明显缩小，瘤重量较对照组肿肿轻，当于每周予以裸鼠 5 F 4 n/g的效果。相一 U 5rg k 因此，用非细胞毒性药物调控胃癌细胞的生长具应有重要的临床价值。对晚期胃癌及胃癌术后的患者，们已经开始联合应用 P我 GL与化疗，评价以 P GL在提高胃癌患者生存率、缓胃癌术后复发方延面的真正作用。一

异性 GR拮抗剂，仅可通过受体后作用机制，不使 GR丧失对 Gs的亲和力，剂量 P大 GL也能通过抑制的释放而发挥抗肿瘤增殖作用。我们的研究结果表明， GL组血清 G P s含量与对照组相近， GL P 对血清含量没有影响，明 P,说 CL发挥抗肿瘤增殖作用并不是通过改变外周血液中 G s水平而实现的，一步完善了 P,进 CL的抗肿瘤生长机制。 参考文献

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般认为 P GL通过与 G竞争 GR,细胞膜磷 s使

酯酶 c上酪氨酸磷酸化作用消失，酯酵 c不能 r磷 r

被激活，响到受体后信息传导系统，影细胞内多胺、蛋白质合成减少，而导致细胞增生速度减慢。我从们观察了丙谷胺对胃癌移植瘤细胞 DIDNA含量、及 S F的影响，现 P, P发 CL能改变胃癌细胞核代谢

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过程，胃癌细胞核合成减慢， N使 D A含量降低，影并(9 8 0— 7收稿)张世琦编辑) 19— 8 2 (

上接第 1 8页 1导宿主的件内抗瘤效应 .国肿瘤生牺治疗杂志，9, ( )中 1% 3 4:

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6秦慧莲 .陈卫 .台应用 1 -联 1 2和 I - . L 7对 T细胞悻外增

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的增强效应 .田肿瘤生轴治疗杂志，9,()14 0 中 1% 32:0~17E A l nJ . oI v : t￣, l T 1 l m P e耻6 a le n g 7吴厚生，坩琪，姜小琦 . H' a释献法涮量细胞舟导的细胞毒用 T Ra岫 g 唧们r n∞雠 1 r口l a d山 D nD=】 . I m u M To ay, I k￣ r d

功能 .海竞盎学杂志，9 774:3~24上 18,( )2 O 38 U . c w∞ P, dbb抽 lI e Y M G口 H,t a nd锄 T 0州 m u i o uretra t [ ft r - eci m ve 1 a m t ml I 3 7, u i h CD28,

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带瘤宿主抗瘤效应的悻内研究 .中国肿瘤生轴洁疗杂志， 9 7 4 19,( )1 1:4~1 9

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4狰兆武，琪热稳定抗置研究进展田外置学，疫学妒册 .谢 f免1

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5抟兆武，谢琪，璋蕞， . 基因转染小鼠淋巴细胞 E _何等} L 4诱