沉降菌测试暴露时间与培养基失水率和微生物回收率的考察与研究

时间：2026-01-16

沉降菌测试暴露时间与培养

基失水率和微生物回收率的考察与研究

李天翥齐岩

(哈尔滨珍宝制药有限公司黑龙江哈尔滨 150060)

摘要:针对洁净区动态沉降菌监测,对上海诺狄生物科技有限公司生产的一次性90mm平皿TSA培养基,在最差温湿度条件下考察了暴露30min、60min、90min、180min的失水率和暴露后对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌的回收率,结果表明,在温度在30℃,湿度在40%,层流送风风速达0.54m/s条件下,暴露180min的一次性90mm平皿TSA培养基能保证各实验菌种培养需要。

关键词:沉降菌暴露时间失水率回收率中图分类号:R91文献标识码:A文章编号:1674-2060(2016)04-0243-02

《药品生产质量管理规范(2010年修订版)》附录1中对无菌药品的生产的洁净环境要求和环境监测更多强调在线监测和动态监测[1]。

无菌药品生产中,尤其是无菌灌装过程,均大量使用动态沉降菌监测无菌生产过程,在层流区域,沉降碟具操作方便、对空气环境破坏较小、不会干扰气流方向、成本较低等优点,被广泛应用[2]。

医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法(GB/T 16294-2010)中规定,动态测试时,培养皿的暴露时间为不大于4h[3]《,药品生产质量管理规范(2010年修订版)》中也规定动态沉降菌监测时间为4h,但单个培养皿暴露时间可以小于4h[1],即考虑到培养皿随着放置时间的延长其培养基会因为失水等原因影响微生物正常生长。我公司为确定合理的沉降菌监测时菌碟更换的时间,以及确认沉降菌暴露时间与培养基微生物回收率的关系,进行了试验。

上,尽量达到或超出标准要求上限,并在试验全程采用无线温湿度记录仪进行过程监控,确保全程能够满足挑战试验环境要求。

1.3 培养基浇注量

我公司沉降菌监测使用的为外购的一次性90mm平皿培养基,培养基为TSA,灌注量为25ml。外购成品平皿培养基配方和灌注量有规定的质量标准和专用设备浇注,故培养基浇注量影响不做考虑。在微生物回收率试验中,为了考察不同批次培养基的结果重现性,选择三个批号的一次性90mm平皿培养基进行试验。

2 试验材料

2.1 材料

90mm预灌装平皿(TSA培养基,上海诺狄生物科技有限公司,批号8309141008-3、8309141014-8、8309141022-6)、风速仪、无线温湿度记录仪、万分之一电子天平、三角烧瓶、刻度吸管等。

试验菌株:枯草芽抱杆菌(CMCC(B)63501)、金黄色葡萄球菌(CMCC(B)26003)、白色念珠菌(CMCC(B)98001)。

菌悬液配制:取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的新鲜培养物接种至营养肉汤培养基内,33℃培养24小时,取白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基内,25℃培养48小时。取上述培养液用0.9%的无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于1000cfu的菌悬液。

1 沉降菌暴露时间影响因素分析

1.1 采样区域

洁净室气流组织分为乱流和层流,根据《药品生产质量管理规范》(2010年修订版)附录1关于层流风速的要求,A级区的风速为0.36-0.54m/s(指导值),A级层流风速要求均高于其他级别的乱流洁净室,而风速是影响培养基失水量的重要因素,风速越高,培养基脱水速度越快,为在试验中挑战最差条件,试验区域选在A级区层流下,并将风速调节至标准上限。

2.2 方法

2.2.1 失水率测定

培养基的微生物回收率与其含水量密切相关,在沉降菌监测时,培养基暴露于空气中,水分不断蒸发流失。为了考察暴露时间与失水率的关系,对暴露不同时间的沉降碟测量重量变化情况,以估计其失水率情况。

1.2 采样环境

不同的生产操作步骤,洁净室的湿度控制标准不同,一般日常湿度控制范围为45-65%,温度控制在18-26℃,环境湿度越低、温度越高,培养基脱水越快,对最终培养的微生物回收率影响也越大。为挑战最差条件,将试验条件控制在湿度45%或以下,温度在26℃或以

图1 预灌装平皿失水率试验温湿度记录曲线图2 预灌装平皿回收率试验温湿度记录曲线

作者简介:李天翥(1978—),女,黑龙江省哈尔滨人,硕士,从事制药企业技术和质量管理工作。

BIOTECHWORLD 生物技术世界243

表1 预灌装平皿失水率试验结果

暴露时间 30min 60min 120min 180min 240min

失水率（%） 1.79 2.90 6.86 14.56 22.02

表3 大肠埃希菌回收率试验结果