6-聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分析过氧化物酶同工(2)
发布时间:2021-06-06
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聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分析过氧化物酶同工酶
区带,以鉴定小麦幼苗过氧化物酶同工酶。通过本实验,主要掌握电泳技术的原理、方法、设计、装臵、凝胶配臵等问题,熟悉所有的操作过程,另外,对同工酶有一个感性的认识。
二、 研究依据及原理:
聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(acrylamide,简称Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(N,N—methylene-bisacylamide,简称Bis)在加速剂N,N,N ,N —四甲基乙二胺(N,N,N ,N —tetramethyl ethylenedia mine,简称TEMED)和催化剂过硫酸铵(ammonium persulfate (NH4)2S2O8,简称AP)或核黄素(ribofavin即vita min B2,C17H20O6N4)的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶,以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,简称PAGE)。
聚丙烯酰胺凝胶有下列特性:
(1)在一定浓度时,凝胶透明,有弹性,机械性能好;
(2)化学性能稳定,与被分离物不起化学反应,在很多溶剂中不溶;
(3)对pH和温度变化较稳定;
(4)几乎无吸附和电渗作用,只要Acr纯度高,操作条件一致,则样品分离重复性好;
(5)样品不易扩散,且用量少,其灵敏度可达10-6g
(6)凝胶孔径可调节,根据被分离物的分子量选择合适的浓度,通过改变单体及交联剂的浓度调节凝胶的孔径;
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