中医药管理局标书(9)

二、研究内容（包括研究的具体方案、内容、方法等）

主要仪器： BIOMIAS 图像分析系统： 湖南中医药大学基础研究院

日本尼泰克 ACE919 型全自动生化分析仪。 法国 S-500P 半自动生化分析仪。 光镜:OLYMPUS BX50 日本产 电镜:日本 JEM-1010(HC)100KV 高衬度透射电子显微镜 3. 实验方法： 造模方法：造模组高糖高脂高胆固醇饲料喂养 2 个月后，禁食 12 小时，断尾 取血，血糖值为 16.7mmol/l-25mmol/l 者入选。造模成功后，各组恢复常规饮 食。 分组方法：动物购回，适应性喂养一周后，随机分成空白对

照组、模型对照 组、中药组、二甲双胍组、中药+二甲双胍组(n=6) ,除空白对照组外，其他动物 均用于造模。造模后，选择符合模型标准的大鼠分别随机分组如下：模型对照 组、中药组、二甲双胍组、中药+二甲双胍组，各组数量保持相等，每组均为 6 只。 给药方法：从造模成功后的第一天开始给药，疗程为 8 周。灌胃情况如下： 1 ○中药组：每日灌胃量相当于临床成人用药量的 10 倍，即 6ml/kg,每日 1 次， 共 8 周； 2 ○二甲双胍组：每日灌胃量相当于临床成人用药量的 10 倍，即 6ml/kg,每日 1 次，共 8 周； 3 ○中药+二甲双胍组：每日灌胃量相当于临床成人用药量的 10 倍，即 6ml/kg,每 日 2 次，共 8 周； 4 ○模型对照组：每日灌胃量相当于临床成人用药量的 10 倍，即 6ml/kg,每日 1 次，共 8 周； 5 ○空白对照组：每日灌相当于临床成人用药量的 10 倍的生理盐水，即 6ml/kg, 每日 1 次，共 8 周； 测试指标及取材 动物给药 8 周后，处死前 12h 禁食，股动脉取血约 4~5ml,其中 1.5ml

于 EDTA+抑肽酶的抗凝试管内，用做 ET 的检测。余血放置于试管内，离心取血 清，备做 NO、INS、TNF-α、TG、BUN、CREA、UA 的检测。立即取胰腺、肝脏、肾 脏病理切片：HE 染色；股动脉、腹主动脉病理切片：MASSON 染色 4.统计方法： 所有数据均采用 SPSS 统计软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差( x ±S)表示。两样本均数比较采用成组 t 检验(One- Sample T Test) ,多样本均 数的两两比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA) 。以 P<0.05 作为有显著性 差异。 5.技术路线： (附图于后) 实验开始前，随机抽取 6 只大鼠作为空白组对照组，并立即断头处死，取血 标本测定生化指标。然后迅速剥离取出双侧髂股动脉、腹主动脉、胰腺、肾脏用 生理盐水冲洗，10%福尔马林原位固定 24h,常规制片，动脉用 MASSON 染色，内 脏用 HE 染色，做光镜、电镜检查。造模成功后，选取成模大鼠，随机分成模型对 照组、中药组、二甲双胍组、中药+二甲双胍组。除模型对照组外，余组均给药。 治疗 8 周后，将全部大鼠处死，收集上述生化、放免及病理切片等各项指标。各 组为 6 只算入统计，认真详细记录所有数据。

技术路线附图如下：

购 入 清 洁 级 Wistar 大 鼠 40 只 ， 适 应 性 喂 养 周。 1

取 6 只断头处 死 作为空白对照组

取血生化指标：FPG、TG、HDL、 TC。 取肝、胰、肾、股动脉、腹主动脉 做病理切片，准备光镜和电镜检

34 只大鼠喂高 糖 高脂高胆固醇饲 料 ( 10% 蔗 糖 ，

8 周后取 6 只 大鼠做 上述指 标

10% 猪 油 ， 2.5% 胆固醇) ,共 8 周。

模型对照组

中药组

用药 8

周后各组分别处 死，测所有指标。

二甲双胍组

中药+二甲双胍组

统计指标，评估标 本，发表论文，实验 结束。