DRR047A定量反转录试剂盒说明书

时间：2025-07-10

Takara Code：DRR047A

PrimeScript®

RT reagent Kit

with gDNA Eraser (Perfect Real Time) （100次量）

宝生物工程(大连)有限公司

内容

● 制品说明 ● 制品内容 ● 保存 ● 特长 ● RNA样品制备 ● 使用注意 ● 操作方法 ● 实验例 ● 引物设计说明 ● 引物设计服务说明

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● 制品说明

为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件，但Total RNA中常常混有基因组DNA，并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增，因此会造成解析结果不准确。为了避免这种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组DNA得不到扩增。但是，此方法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因，同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本方法。在这种情况下，我们常常需要对Total RNA样品进行DNase I处理，以除去残存的基因组DNA。而DNase I处理通常要进行复杂的纯化操作，同时会造成RNA的降解和损失。

PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA进行Real Time RT-PCR反应的专用反转录试剂。Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA Eraser，通过42℃，2 min即可除去基因组DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分，经过gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行15 min的反转录反应合成cDNA，因此从基因组DNA去除到cDNA合成只需要17 min即可完成。

选择与使用本制品合成的cDNA适用于SYBR® Green分析法和TaqMan®探针分析法，可以根据实验目的，SYBR® Premix Ex TaqTM II （Perfect Real Time）、Premix Ex TaqTM （Probe qPCR）等Takara Perfect Real Time系列定量试剂组合使用。

● 制品内容（20 μl反应×100次）

1. gDNA Eraser

2. 5×gDNA Eraser Buffer*1 3. PrimeScript® RT Enzyme Mix I*2

4. 5×PrimeScript® Buffer 2（for Real Time）*3 5. RT Primer Mix*4 6. RNase Free dH2O

7. EASY Dilution（for Real Time PCR）*5

100 μl 200 μl 100 μl 400 μl 400 μl 1 ml×2 1 ml

*1 5×gDNA Eraser Buffer在反转录反应前使用，请务必进行基因组DNA的除去反应。 *2含有RNase Inhibitor。 *3含有dNTP Mixture。

*4含有Oligo dT Primer和Random 6 mers。

*5制作标准曲线时梯度稀释cDNA或RNA标准品的稀释液。模板DNA或RNA如果用水或TE Buffer稀释时，由于受Microtube吸附作用等的影响，往往不能准确地进行稀释，导致实验结果精度降低。使用本制品时，即使稀释至低浓度也能够进行准确地稀释，容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。EASY Dilution也可以单独购买（Takara Code：D9160）。 EASY Dilution请与本公司Real Time PCR试剂组合使用，对于其他公司的同类制品的适用性本公司尚未进行确认。

● 保存： -20℃。 ● 特长

1．含有去除基因组DNA的gDNA Eraser，只需2 min即可除去基因组DNA。

2．只需15 min即可高效合成Real Time PCR反应用模板cDNA，是进行2 Step Real Time RT-PCR反应

的最佳试剂。

3．反转录引物使用了Random 6 mers和Oligo dT Primer混合的RT Primer Mix，可以均匀合成样品中的

各种cDNA。

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4．本制品提供了SYBR Green分析法和TaqMan探针分析法各自最适反应体系，可以根据分析方法选择

体系。

5．制品中附加了标准曲线制作用稀释液EASY Dilution（for Real Time PCR），将Total RNA或cDNA稀

释至低浓度时也能够进行准确稀释，容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。

● RNA样品制备

本制品是将RNA反转录成cDNA的专用试剂。RNA的纯度会影响cDNA的合成量，而制备RNA的关键是要抑制细胞中的RNA分解酶和防止所用器具及试剂中的RNA分解酶的污染。因此，在实验中必须采取以下措施：戴一次性干净手套；使用RNA操作专用实验台；在操作过程中避免讲话等等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的RNA分解酶的污染。

【使用器具】

尽量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，应在使用前按下列（1）或者（2）方法进行处理。（1）干热灭菌（180℃，60 min）

（2）用0.1% DEPC（焦碳酸二乙酯）水溶液在37℃下处理12小时。然后在120℃下高压灭菌30分钟

以除去残留的DEPC。

RNA实验用的器具和仪器建议专门使用，不要用于其它实验。

【试剂配制】

用于RNA实验的试剂，需使用干热灭菌（180℃，60 min）或用上述方法进行DEPC水处理灭菌后的玻璃容器盛装（也可使用RNA实验用的一次性塑料容器），使用的无菌水需用0.1%的DEPC处理后进行高温高压灭菌。

RNA实验用的试剂和无菌水都应专用，避免混用后交叉污染。

【制备方法】

使用简单的RNA纯化方法即可获得满足于RT-PCR反应的RNA（只需少量的RNA便可进行RT-PCR反应）。但为了保证实验的成功率，建议使用GTC法（异硫氰酸胍法）制备的高纯度RNA。从培养细胞、组织中提取时，使用RNAiso Plus（Takara Code: D9108）。

● 使用注意

以下为使用本试剂盒时的注意事项，使用前一定认真阅读。