高脂血症相关性急性胰腺炎的比较蛋白质组学研究

高脂血症相关性急性胰腺炎的比较蛋白质组学研究

摘要

第一部分高脂血症对胰腺组织损伤机制的蛋白质组学分析研究背景与目的

随着生活水平的提高，临床上，高脂血症的发病率日趋增多。甘油三酯在脂蛋白脂酶的作用下水解成游离脂肪酸（ＦＦＡ），后者进入细胞内进行氧化代谢供应能量或储存在脂肪内。当体内游离脂肪酸水平增高，超过脂肪组织的储存能力和各组织对游离脂肪酸的氧化能力，在器官组织产生脂毒性。长期暴露于游离脂肪酸中易损害胰岛ｐ细胞释放胰岛素的功能，并诱导１３细胞凋亡，与急性胰腺炎、慢性胰腺炎、非胰岛素依赖性糖尿病等疾病关系密切。本研究以大鼠为实验动物，诱导大鼠高甘油三酯血症模型，从高脂血症胰腺组织的蛋白质组着手，利用相差凝胶电泳质谱技术，寻找高脂血症状态下胰腺组织的差异表达蛋白，并对这些差异表达蛋白分子进一步深入研究，以期丰富和完善高脂血症状态下胰腺组织损伤的病理生理变化的分子机制。

方法

采用断乳一周雄性ＳＤ大鼠，随机分成二组，每组５只。其中一组为高脂血症组，饲以高脂饮食，对照组饲以普通饲料。试验６周后处死动物，取胰腺组织，裂解提取蛋白质。对胰腺组织进行相差凝胶电泳（ＤＩＧＥ），应用ＤｅＣｙｄｅｒ６．５图像分析软件将高脂血症组和正常组胰腺组织胶图进行匹配，不同胶匹配点相对含量差异有统计学意义的点为差异蛋白质点。对差异蛋白质进行胶内消化、ＭＡＬＤＩ．ＴＯＦ．ＴＯＦ二级质谱鉴定和数据库搜索确定差异蛋白质。采用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法验证部分差异明显蛋白质表达情况。

结果

高脂血症大鼠胰腺组织病理学可见腺泡内散在的脂肪空泡沉积。胰腺组织相差凝胶电泳重复性满意，显示的蛋白质斑点在分布、背景等方面基本一致。通过ＤｅＣｙｄｅｒ６．５图像分析软件将高脂血症组和正常组胰腺组织胶图进行匹配，高脂血症组胰腺组织与正常胰腺组织相比，上调蛋白质３种，下调蛋白质１１种。其中上调蛋白质为：精氨酸酶ＩＩ、甘氨酸脒基转移酶和核糖核酸酶抑制剂，高脂血症组上述蛋白质的含量较正常组分别上调２．１９倍、１．８２倍和１．１２倍；下调蛋白质包括酪氨酰ｔＲＮＡ合成酶、ａ．淀粉酶、脂肪酶、ＤＪ．１蛋白和Ｃｕ、Ｚｎ超氧化物歧化酶等，高脂血症组较正常组分别下调２．４８倍、２．３７倍、１．８５倍、１．７３倍和１．６５倍。采用方差分析，Ｐ＜０．０５，差异有统计学意义。这些蛋白质在胰腺组织中主要与脂肪消化、细胞能量代谢、

氧化应激、胶原合成、细胞增殖与分化等相关。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法证实高脂血症组大鼠胰腺组织精氨酸酶ＩＩ表达较正常胰腺组织明显增强，０【．淀粉酶表达较正常胰腺组织明显减弱。

结论

成功构建高脂血症大鼠模型。利用蛋白质组学技术，从整体角度将蛋白质变化综合在一起，得到高脂血症大鼠胰腺组织的蛋白质组特征性变化。在高脂血症大鼠的胰腺病理生理改变中，差异表达的蛋白质可能通过脂肪消化、细胞能量代谢、氧化应激、胶原合成、细胞增殖与分化等途径对胰腺组织造成损伤，这些蛋白质的改变可能成为高甘油三酯对胰腺损伤的早期预警标志。

关键词胰腺，高脂血症，相差凝胶电泳

第二部分高脂血症合并急性胰腺炎的胰腺组织蛋白质组学分析研究背景与目的

急性胰腺炎在临床发病率日渐增高，高脂血症是继胆源性和酒精源性之后急性胰腺炎的又一重要病因，脂质毒性不仅是作为急性胰腺炎的病因，而且能进一步加重急性胰腺炎的病情。本实验通过高脂血症大鼠为实验动物，诱导高脂血症大鼠合并急性水肿性胰腺炎和高脂血症合并急性坏死性胰腺炎动物模型，利用双向凝胶电泳质谱技术，

寻找高脂血症合并急性胰腺炎状态下胰腺组织的差异表达蛋白，并对这些差异表达蛋白分子进一步深入研究，以探讨高脂血症加重急性胰腺炎的胰腺组织病理生理变化的分子机制。

方法

采用断乳一周雄性ＳＤ大鼠，随机分成二组，每组１０只。其中一组为高脂血症组，饲以高脂饮食，对照组饲以普通饲料。试验６周后高脂组和对照组均分别予雨蛙肽腹腔内注射和牛磺胆酸钠胰管内注射，分别建立急性水肿性胰腺炎和急性坏死性胰腺炎模型，造模后９ｈ处死动物，取胰腺组织，裂解提取蛋白质。采用相差凝胶电泳（ＤＩＧＥ），检测高脂血症合并急性胰腺炎组与对照组的蛋白质差异。采用免疫组化验证差异明显的蛋白质表达情况。

结果

高脂血症合并急性水肿性胰腺炎和高脂血症合并急性坏死性胰腺炎动物模型胰腺组织有典型组织病理学改变。通过ＤｅＣｙｄｅｒ６．５图像分析软件进行匹配，高脂血症急性坏死性胰腺炎组与正常血脂急性坏死性胰腺炎组分析到５９个差异点，３９个差异点经质谱成功鉴定，２３个点在高脂血症急性坏死性胰腺炎组上调，１６个点下调。高脂血症急性水肿性胰腺炎组与正常血脂急性水肿性胰腺炎组分析到１２个差异点，７个差异点经质谱成功鉴定，２个点在高脂血症急性水肿性胰腺炎组上调，５个点下调。差异蛋白质主要包括代谢酶类（脂肪酶 …… 此处隐藏：10162字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……