血清谷丙转氨酶alt的测定

血清谷丙转氨酶alt的测定

血清谷— 血清谷—丙转氨酶活性的 测定(改良赖氏法)

血清谷丙转氨酶alt的测定

【目的要求】 目的要求】 1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。 1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。 2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作 2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作 方法。 3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。 3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。

血清谷丙转氨酶alt的测定

【实验原理】 实验原理】 血清中的谷-丙转氨酶(ALT),在37℃ 血清中的谷-丙转氨酶(ALT),在37℃、 pH7.4的条件下，可催化基质(底物)液中 pH7.4的条件下，可催化基质(底物)液中 的丙氨酸与α 的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：

血清谷丙转氨酶alt的测定

生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加 生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加 成反应，生成丙酮酸-2,4成反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，进而在碱性环境中 生成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围 内与丙酮酸的生成量，亦即与ALT活性的高低成正比关系。 内与丙酮酸的生成量，亦即与ALT活性的高低成正比关系。 据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或通过 标准曲线查出血清中ALT的活性。 标准曲线查出血清中ALT的活性。

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尽管基质液中余下的a 尽管基质液中余下的a-酮戊二酸同样可生成红棕色苯腙硝 醌化合物而影响测定结果，但因其量不多，加之对505nm 醌化合物而影响测定结果，但因其量不多，加之对505nm 的吸光度远不如丙酮酸生成的苯腙硝醌化合物强，尤其用 标准曲线作测定时，所用的酶活性单位通过卡门氏分光光 度速率法矫正，摈弃了赖氏法一些固有弊端，结果比其他 比色法准确。故卫生部临检中心建议国内无条件使用连续 监测法的单位使用赖氏法。1981年全国常规生化检验方法 监测法的单位使用赖氏法。1981年全国常规生化检验方法 学术讨论会认为赖氏法测定ALT活性较为合理，全国肝炎 学术讨论会认为赖氏法测定ALT活性较为合理，全国肝炎 协作会议也建议统一使用改良赖氏法。

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取干净试管12支，按下表所示标号，要求各S管和U 取干净试管12支，按下表所示标号，要求各S管和U管进行双管平行操 作。先做对照管和测定管，在30min保温期间再做空白管和标准管。 作。先做对照管和测定管，在30min保温期间再做空白管和标准管。

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【实验结果】 实验结果】 1.赖氏法测定ALT的标准曲线(即计量反应曲线) 在 1.赖氏法测定ALT的标准曲线(即计量反应曲线) 坐标纸上以上表中An- 0之值为纵坐标，相应的 坐标纸上以上表中An-A 0之值为纵坐标，相应的 酶活性的卡门氏单位

为横坐标作图，即得赖氏法 测定ALT的标准曲线 测定ALT的标准曲线 2.标本中ALT活性结果 2.标本中ALT活性结果 ⑴查标准曲线 利用测定所得的吸光度结果(AU- 利用测定所得的吸光度结果(AU- AB),便可从标准曲线上查得标本的ALT结果 AB),便可从标准曲线上查得标本的ALT结果 ⑵计算 将实验测得的AU-AB 、AS 代入下面计 将实验测得的AU- 算公式，即可算得标本中ALT活性 算公式，即可算得标本中ALT活性

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【方法评价 】 ALT活性测定主要有两类。一是卡门氏(Karman) ALT活性测定主要有两类。一是卡门氏(Karman) 分光光度法，测定的是酶促反应速率。其原理如 下： 由于NADH在波长340nm处有特异吸收峰，因此 由于NADH在波长340nm处有特异吸收峰，因此 ALT的活性可通过NADH的减少量，亦即通过 ALT的活性可通过NADH的减少量，亦即通过 340nm吸光度的减少量间接作出定量测定。这一 340nm吸光度的减少量间接作出定量测定。这一 方法特异性、准确性高。但是此法除要加入待测 酶ALT的底物外，还需要加入指示酶LDH及其辅 ALT的底物外，还需要加入指示酶LDH及其辅 酶NADH,又需用紫外分光光度计，因此不易为 NADH,又需用紫外分光光度计，因此不易为 一般临床化验室推广。

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二是比色测定法，如：金氏法(King法)、穆氏法(Mohun 二是比色测定法，如：金氏法(King法)、穆氏法(Mohun 法)和赖 氏法(Reitman-Frankel法)。其原理、试剂、操作步骤及作用温度等完全 氏法(Reitman-Frankel法)。其原理、试剂、操作步骤及作用温度等完全 相同。不同之处在于作用时间：King法60min ,Mohun法和 Reiman法 相同。不同之处在于作用时间：King法 Mohun法和 Reiman法 30min。因此它们的单位定义和标准曲线制备也不同。King法单位定义是： 30min。因此它们的单位定义和标准曲线制备也不同。King法单位定义是： 每1ml血清在37℃条件下与底物作用60 min,生成1μmol丙酮酸称为一个单 1ml血清在37℃条件下与底物作用60 min,生成1μmol丙酮酸称为一个单 位。 Mohun 法单位定义是：每毫升血清在pH=7.4,37℃条件下与底物作 法单位定义是：每毫升血清在pH=7.4,37℃条件下与底物作 用30 min,每生成2.5微克丙酮酸为1单位。赖氏法没有制定自身的单位定 min,每生成2.5微克丙酮酸为1 义，而是以实验数据套用速率法的卡门氏单位作表示的。 …… 此处隐藏：1475字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……