16SrRNA序列分析法在医学微生物鉴定中的应用_周煜
时间：2026-01-20
生
物
技
术
通
讯
序列分析法在医学微生物鉴定中的应用周煌北京
北京微生物流行病研究所
摘要
序列分析作为微生物系统分类的主要依据已得到了广泛认同随着微生物核糖,。
,
体数据库的日益完善该技术成为细菌分类和鉴定的一个有力工具本文概述了,
序列分。
析法的技术步骤以及该技术在医学微生物研究中的应用总结了目前文献报导的各种致病微生物种属特异性关键词
引物和探针序列同时分析了该技术在应用中存在的一些问题医学微生物鉴定
,
,
‘
可
翻
舒
,
刀
,
’
一
传统的细菌系统分类的主要依据是形态特征和生理性状采取的主要方法是对细菌进行纯培养分,
,
即古生菌
也称
,
细
菌。
也称,
和真核生物
离然后从形态学生理生化反应特征以及免疫学特
,
、
的三域理论逐渐得到认同并得
性加以鉴定
。
本世纪
年代开始分子遗传学和分
,
到了基因组研究结果的支持
年詹氏产甲烷全部基因序列分析,
子生物学技术的迅速发展使细菌分类学进人了分子生物学时代许多新技术和方法在细菌分类学中得到广泛应用。
球菌,
。
口
“
二石。
,
结果说明甲烷球菌不同于任何已知细菌表明了古生菌是一个独立的域
序列分析作为微,,
年代末糖体类似的为合适。
,
开始采用寡核昔酸编目,
生物分类系统的主要依据也得到了广泛认同随着
法对生物进行分类他通过比较各类生物细胞的核特征序列认为,
微生物核糖体数据库的日益完善该技术成为细菌分类和鉴定的一个有力工具。
及其
基因序列作为生物系统发育指标最
其主要依据是它们为细胞所共有其功能
序列分析的基本原理和技术
同源且最为古老既含有保守序列又含可变序列分子大小适合操作它的序列变化与进化距离相适应田。
步骤核糖体,
依据
序列绘制的生命进化树个域。
,
将地球上的所有细胞生物划分为
是与核糖体蛋白结合的。
分
子在蛋白质的翻译中起重要作用
原核生物细菌
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生
物
技
术
通
讯
和古生菌含有
、
和和和
等
种。。
,
其大种一是将
基因片段的分
析方法主要包括以下
小分别约为之对应的为、
、
个碱基或,
真核生物与的
产物克隆到质粒载体上进行测数据库中的序列进行比较确定其,,
其中作为小亚
序与,
,
单位核糖体
的,
在进化树中的位置从而鉴定样本中可能存在的微生物种类该方法获得的信息最全面但在样品成分复杂的情况下需要大量的测序工作种属特异性的探针与微生物组成信息,。
大小最适合于进化分析通过比较各类生物的基因序列从序列差异计算它们之间的进化距离可以绘制出生物进化树因此,、、
,
。
二是通过
,
。
序
产物杂交以获得
列分析技术的基本原理就是从微生物样本中钓取的基因片段通过克隆测序或酶切探针杂交获得,
此外探针也可以直接与样品进行,。
原位杂交检测通过原位杂交不仅可以测定微生物的形态特征和丰度而且能够分析它们的空间分布该方法简单快速主要应用于快速诊断但可能出现假阳性或假阴性结果第三是对性片段长度多态性,,。
,
序列信息再与,
,
数据库中的序列数据或其它数据进行比较确定其在进化树中的位置从而鉴定样本中可能存在的微生物种类。
,
,
产物进行限制
其技术步骤主要包括以下的获得
步,
。
基因组
分析通过观察酶切电泳图。
首先从微生物样品中直接提取总种选择是提取微生物细胞中的核糖体型的细菌含有,
对易于。
谱数值分析确定微生物基因的核糖体型,
、
,
培养的微生物可通过培养富集后再进行提取。
另一
再同核糖体库中的数据进行比较分析样品中。
一个典
微生物组成或不同微生物的种属关系,
护一护个核糖体而基因组
目前国际上有许多核酸数据库能够检索核糖体
中
操纵子即,
序列的拷贝数相对较少个左右,
核酸序列一些软件可用于序列对比分析和构建进化树如,
原核生物一般为易于降解,,
因此,
在细的提取较,
,
和
软件此外一些研
。
胞中的含量很高易于获得较多的模板但是的提取技术相对于。
究结构还建立了专门用于核糖体序列分析的数据库其中最著名的是美国密歇根州立大学的一
为复杂一般研究多采用提取细胞总根据情况选择提取胞
中很快降解提取体细胞川。
但也可
库该数据库目序列用户可以和网,
,
由于
在死亡的细
前包括通过匿名
多个小亚单位。。
,
通过返转录钓取
序列的方法能够区分被检测的细胞是否为活和软件其中,
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