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ｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｎｄｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｆｉｒｓｔｓｔｒａｎｄ．Ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｆｉｒｓｔｓｔｒａｎｄ

，ｔｈｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｗａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｂｙｔｈｅｗａｓｕｓｅｄａｓａｔｅｍｐｌａｔｅ

ｕｓｅｏｆｔｈｅＣＭＶ２ＳＰ１／ＣＭＶ２ＡＳＰ２，ＣＭＶ２ＳＰ３／ＣＭＶ２ＡＳＰ４ｏｆｔｈｅｄｅｓｉｇｎｐｒｉｍｅｒｓＣＭＶＲＮＡ２，ａｆｔｅｒｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｏｆｔｈｅａｍｐｌｉｆｉｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅ，ｔｈｅＤＮＡＭＡＮ（Ｖｅｒｓｉｏｎ５．２．２，Ｌｙｎｎｏｎ

）ｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｓｏｆｔｗａｒｅｗａｓｕｓｅｄｆｏｒｓｅｑｕｅｎｃｅＢｉｏｓｏｆｔ

［９］

ａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｅｖｏｌｕｔｉｏｎｔｒｅｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ．ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＲＮＡｉｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｆｒａｇｍｅｎｔｓ　ＴｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｄＲＮＡ２ｇｅｎｏｍｅｓｅｑｕｅｎｃｅｗａｓａｎａｌｙｚｅｄａｎｄｔｈｅｃｏｎｓｅｒｖｅｄｒｅｇｉｏｎｓｉｎｄｅｎｔｉｆｉｅｄｔｏｄｅｓｉｇｎａｎｄｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｐｒｉｍ，ａｎｄｔｈｅｇｅｎｅｆｒａｇｍｅｎｔｐｒｅｓｅｒｖｅｄｏｎｔｈｅＴｖｅｃｔｏｒｗａｓｅｒｓｕｓｅｄａｓａｔｅｍｐｌａｔｅ，ｔｈｅｔｗｏｐａｉｒｓｏｆｐｒｉｍｅｒｓＣＲ２Ｋｐ／ＣＲ２ＳＢａｎｄＣＲ２Ｂｇ／ＣＲ２ＳＢｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏａｍｐｌｉｆｙｔｈｅｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ＆ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＶｏｌ．１１，Ｎｏ．５，２０１０

ａｃｉｄｈｏｍｏｌｏｇｙｗａｓｏｆ７１．３％－９８．８％ａｎｄ７４．０％－９８．５％

（Ｔａｂｌｅ３），ｉｎｗｈｉｃｈｔｈｅＮＳ０４ｉｓｏｌａｔｅｈａｄｈｉｇｈｈｏｍｏｌｏｇｙｗｉｔｈＰｈｙｌｉｎｅｓｗｈｉｃｈｗａｓｆｒｏｍＺｈｅｊｉａｎｇｏｆＣｈｉｎａ，ｔｈｅＧｅｎｂａｎｋｎｕｍｂｅｒｗａｓＤＱ４１２７３１（Ｆｉｇ．２），ｔｈｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅａｎｄａｍｉｎ

ｏ

ｆｒａｇｍｅｎｔＰＣＲ＿ＣＲ２＿ＢＫａｎｄＰＣＲ＿ＣＲ２＿ＳＢ．ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｐＢｉ３５ＳＣＲ２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒ　ＡｆｔｅｒｔｈｅａｍｐｌｉｆｉｅｄＰＣＲ＿ＣＲ２＿ＢＫｗａｓｒｅｃｏｖｅｒｅｄｗｉｔｈＢａｍＨⅠａｎｄＫｐｎⅠｄ

ｉｇｅｓｔｉｏｎ，ｔｈｅｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｄｉｇｅｓｔｅｄｐｉＲＤＧ１２ｓｉｔｅｓｗｅｒｅｉｎｓｅｒｔｅｄ

，ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｐｉＲＤ＿ＣＲ２．Ｓｆｉｒｓｔｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｖｅｃｔｏｒｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄ（Ｆｉｇ．１Ａ）．ＴｈｅａｍｐｌｉｆｉｅｄＰＣＲ＿ＣＲ２＿ＳＢｗａｓｒｅｃｏｖｅｒｅｄｗｉｔｈＢｇｌⅡａｎｄＳａｃⅠｄ

ｉｇｅｓｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｄｉｇｅｓｔｅｄｐｉＲＤ＿ＣＲ２．Ｓｓｉｔｅｓｗｅｒｅｉｎｓｅｒｔｅｄ

，ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｐｉＲＤ＿ＣＲ２ｓｅｃｏｎｄｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｖｅｃｔｏｒｗａｓｇａｉｎｅｄ（Ｆｉｇ．１Ｂ）．ＡｆｔｅｒｔｈｅｐｉＲＤ＿ＣＲ２ｖｅｃｔｏｒｗａｓｄｉｇｅｓｔｅｄｗｉｔｈＸｂａⅠａｎｄＥｃｏＲⅠ，ｔｈｅｓｍａｌｌｆｒａｇｍｅｎｔｗａｓｉｎｓｅｒｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｓｉｔｅｓｏｆｄｉｇｅｓｔｅｄｐＢｉ３５ＳＧ１２，ａｎｄｆｉｎａｌｌｙｔｈｅｐＢｉ３５ＳＣＲ２

ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄ（

Ｆｉｇ．１Ｃ），ｔｈｅｄｅｓｉｇｎｏｆｖｅｃｔｏｒｗａｓｃｏｍｐｌｅｔｅｄｗｉｔｈＶｅｃｔｏｒＮＴＩａｓｓｉｓｔ

．

Ｆｉｇ．１　ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｐｉＲＤＣＲ２．Ｓ（Ａ），ｐｉＲＤＣＲ２（Ｂ）ａｎｄ

ｐＢｉ３５ＳＣＲ２

（Ｃ）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒＧｅｎｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｔｏｔｏｂａｃｃｏ　Ｔｈｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ

ｐＢｉ３５ＳＣＲ２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｗａｓｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓＧＶ３１０１，ｔｈｅＮｉｃｏｔｉａｎａｔｏｂａｃｃｏ（Ｎｔ）ｌｅａｖｅｓｗｅｒｅｃｕｔｉｎｔｏ１ｃｍｏｆｌｅａｆｄｉｓｃ，ｗｈｉｃｈｗｅｒｅｔｈｅｎｍｉｘｅｄｗｉｔｈＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｉｎｆｅｃｔｉｏｎｌｉｑｕｉｄｆｏｒ５－１０ｍｉｎｏｆｓｏａｋｉｎｇ，ｔｈｅ

ｅｘｃｅｓｓｂａｃｔｅｒｉａｌｉｑｕｉｄｗａｓｒｅｍｏｖｅｄａｎｄｄｒｉｅｄ，ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｙｗｅｒｅｐｌａｃｅｄｏｎｔｈｅｃｏｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍ（

ＭＳ＋０．５ｍｇ／Ｌｏｆ６ＢＡ）， …… 此处隐藏：2330字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……