ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，１１（５）：６９－７２Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ２０１０，ＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＨＡＡＳ．Ａｌｌｒｉｇｈｔｓｒｅｓｅｒｖｅｄ．

ＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ

ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＲＮＡｉＶｅｃｔｏｒＷｈｉｃｈＲｅｓｉｓｔＣｕｃｕｍｂｅｒＭｏｓａｉｃＶｉｒｕｓａｎｄＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＴｏｂａｃｃｏ

ＺＨＡＮＧＹｕ，ＺＨＥＮＧＹｉｎｙｉｎｇ，ＺＨＡＯＦｅｎｇｙｕ，ＱＩＡＯＹａｈｏｎｇ，ＣＵＩＢａｉｍｉｎｇ，ＸＩＡＮＧＢｅｎｃｈｕｎ

ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｒｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＳｈｉｈｅｚｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ／ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＳｈｉｈｅｚｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｉｈｅｚｉ８３２００３

Ａｂｓｔｒａｃｔ　［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］ＡｉｍｅｄｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔＲＮＡｉｖｅｃｔｏｒｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｏｃｕｃｕｍｂｅｒｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓａｎｄｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄｔｈｉｓｖｅｃｔｏｒｉｎｔｏｔｏｂａｃｃｏ．［Ｍｅｔｈｏｄ］ＲＴＰＣＲｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｔｏａｍｐｌｉｆｙｃｕｃｕｍｂｅｒｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓＮＳ０４ａｎｄｐｒｏｃｅｓｓＲＮＡ２ｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｏｆｔｏｍａｔｏｉｓｏｌａｔｅｓ．ＴｈｅａｎａｌｙｓｉｓｒｅｓｕｌｔｓｏｆｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｉｎＲＮＡ２ｅｎｃｏｄｅｄＣＭＶ２ａｈａｄ９８．０％ａｎｄ９６．５％ｈｏｍｏｌｏｇｙｗｉｔｈｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅａｎｄａｍｉｎｏａｃｉｄｏｆ

，Ｃｈｉｎａ．ＴｈｅｒｅｐｌｉｃａｓｅｆｒａｇｍｅｎｔｉｎＣＭＶＲＡＮ２ｇｅｎｅｗａｓｔａｋｅｎａｓｔａｒｇｅｔｓｅｑｕｅｎｃｅｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｐＢｉ３５ＳＣＲ２ｅｕｋａｒｙＤＱ４１２７３１ｉｓｏｌａｔｅｏｆＺｈｅｊｉａｎｇ

ｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒ，ｔｈｅｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ．Ｔｈｒｏｕｇｈａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｅｄｉａｔｅｄｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｗａｓｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄｉｎｔｏｔａｂａｃｃｏａｎｄＰＣＲｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｔｏｃｈｅｃｋｔｈｅｔｒａｎｓｆｅｒ．ＴｈｅＰＣＲｒｅｓｕｌｔｓｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｈａｄｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｏｆｐＢｉ３５ＳＣＲ２ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄｉｎｔｏｔａｂａｃｃｏ．［Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ］Ｔｈｅｏｂｔａｉｎｅｄｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｔｏｂａｃｃｏｃｏｕｌｄｂｅｕｓｅｄａｓｃｈａｌｌｅｎｇｅｔｅｓｔｍａｔｅｒｉａｌｉｎｆｏｌｌｏｗｉｎｇｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｎｄｐｒｏｖｉｄｅｄｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｓｔｕｄｙｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｔｏｍａｔｏｒｅｓｉｓｔｃｕｃｕｍｂｅｒｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　Ｃｕｃｕｍｂｅｒｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ；Ｈｏｍｏｌｏｇｙ；ＲＮＡｉｖｅｃｔｏｒ；Ｔｏｂａｃｃｏ；Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ

　　Ｃｕｃｕｍｂｅｒｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ（ＣＭＶ）ｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｐａｔｈｏｇｅｎｔｏｃａｕｓｅｙｉｅｌｄｒｅｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｅｖｅｎｎｏｈａｒｖｅｓｔｏｆａｖａｒｉｅｔｙｏｆｅｃｏｎｏｍｉｃｃｒｏｐｓ，ｂｕｔｔｈｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌａｎｔｉｖｉｒｕｓｂｒｅｅｄｉｎｇ，ｔｉｓｓｕｅｄｅｔｏｘｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｐｅｓｔｉｃｉｄｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｃａｕｓｅｅｎｖｉ

［１］

ｒｏｎｍｅｎｔａｌｐｏｌｌｕｔｉｏｎ，ａｎｄｔｉｍｅｃｏｎｓｕｍｉｎｇ．Ｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ，ｔｈｅｄｉｓｃｏｖｅｒｅｄｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎｏｆｇｅｎｅｓｉｌｅｎｃｉｎｇｉｓａｃｏｍｍｏｎｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎｅｘｉｓｔｅｄｉｎｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｉｆｅ，ｗｈｉｃｈｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｗａｙｏｆｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．ＴｈｅｇｅｎｅｓｉｌｅｎｃｉｎｇｏｆＧＭｓｐｅｃｉｆｉｃｃａｎｂｅｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｂｙｇｒａｆｔｉｎｇｆｒｏｍｓｉｌｅｎｔｓｔｏｃｋｔｏｎｏｎｓｉｌｅｎｔｓｃｉｏｎ，ｔｈｅｎｔｈｅｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎｏｆｔｈｅｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎｇｏｆｔｈｉｓｋｉｎｄｏｆｇｅｎｅｓｉｌｅｎｃｉｎｇｓｉｇｎａｌｆｒｏｍｏｎｅｃｅｌｌｏｒａｔｉｓｓｕｅｔｏａｎｏｔｈｅｒｃｅｌｌｏｒｔｉｓｓｕｅｉｓｄｅｆｉｎｅｄａｓｓｙｓｔｅｍｉｃ

［２－５］

ＲＮＡｉ（ＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ）．ＲＮＡｉｈａｓｓｏｍｅａｄｖａｎｔａｇｅｓｗｈｉｃｈａｒｅｄｅｆｉｃｉｅｎｔｉｎｔｈｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｇｅｎｅｔｉｃｒｅｓｅａｒｃｈｍｅｔｈｏｄｓ，ｉｔｈａｓｐｒｏｖｉｄｅｄａｎｅｗｗａｙｔｏｓｔｕｄｙｐｌａｎｔｇｅｎｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｄｅｌｅｔａｎｔｃａｎｂｅｃｒｅａｔｅｄｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙｉｎｈａｂｉｔａｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅｅｘ

［６］

ｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃｇｅｎｅｓ．Ｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃ，ｅｆｆｉ

，ＲＮＡｉｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｈａｓａｃｉｅｎｔａｎｄｓｙｓｔｅｍａｔｉｃＲＮＡｉｓｅｑｕｅｎｃｅ

，ｉｔｈａｓｂｅｅｎｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｉｔｓｕｎｉｑｕｅｒｏｌｅｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙｓｐｅｃｉａｌｒｏｌｅ

ｉｎｔｈｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｖｉｒｕｓｅｓ，ｗｏｒｍｓａｎｄｈａｒｍｆｕｌ

［７－８］

ｐａｒａｓｉｔｅｓ，ａｓｗｅｌｌａｓｇｒａｆｔｉｎｇｂｒｅｅｄｉｎｇ．

Ａｔｐｒｅｓｅｎｔ，ｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｒｅｓｅａｒｃｈｅｓｏｎＣＭＶａｒｅｆｏｃｕｓｅｄｏｎｒｅｐｌｉｃａｓｅｐｒｏｔｅｉｎｅｎｃｏｄｅｄｂｙＲＮＡ１ｇｅｎｏｍｅｏｒＣＰｐｒｏｔｅｉｎｅｎｃｏｄｅｄｂｙＲＮＡ３ｓｕｂｇｅｎｏｍｉｃ．Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｐｒｅｃｌｏｎｅｄＣＭＶＲＮＡ２ｇｅｎｏｍｅｓｅｑｕｅｎｃｅ，ｔｈｅ２ａｒｅｐｌｉｃａｓｅｐｒｏｔｅｉｎｗｈｉｃｈｗａｓｅｎｃｏｄｅｄｂｙＲＮＡ２ｇｅｎｏｍｅｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｓｉｇｎＲＮＡｉａｎｔｉｖｉｒａｌｖｅｃｔｏｒ，ｔｈｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄＲＮＡｉｖｅｃｔｏｒｗａｓｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｔｏｔｏｂａｃｃｏｔｈｒｏｕｇｈＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｅｄｉａｔｅｄ

，ａｎｄｔｈｅａｎｔｉｖｉｒａｌａｂｉｌｉｔｙｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｔｏｂａｃｃｏｐｌａｎｔｓｍｅｔｈｏｄ

ｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｃｈａｌｌｅｎｇｅｔｅｓｔｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｗｈｅｔｈｅｒｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｃａｎｂｅａｐｐｌｉｅｄｔｏｔｏｍａｔｏｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．

Ｒｅｃｅｉｖｅｄ：Ｍａｙ２６，２０１０　　Ａｃｃｅｐｔｅｄ：Ｊｕｎｅ２９，２０１０ＳｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏｏｐｅｒａｔｉｏｎＰｒｏｇｒａｍ（２００８ＤＦＡ３０５６０）；ＰｒｅｌｉｍｉｎａｒｙＲｅｓｅａｒｃｈＳｐｅｃｉａｌＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆ９７３Ｐｒｏｇｒａｍ（２００８ＣＢ１１７０１８）；ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｊｅｃｔｆｏｒＨｉｇｈＬｅｖｅｌｏｆＴａｌｅｎｔｓｏｆＳｈｉｈｅｚｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＲＣＺＸ２００７３２）．

ｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ．Ｅｍａｉｌ：ｘｂｃ＠ｓｈｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎＣ

ＭａｔｅｒｉａｌｓａｎｄＭｅｔｈｏｄｓ

Ｍａｔｅｒｉａｌｓ

ｐｉＲＤＧ１２ａｎｄｐＢｉ３５ＳＧ１２ｗｅｒｅｓａｖｅｄｂｙＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｒｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＳｈｉｈｅｚｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ／ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＳｈｉｈｅｚｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＴＯＰ１０ｃｏｍｐｅｔｅｎｔｃｅｌｌｗａｓｐｕｒｃｈａｓｅｄｆｒｏｍＳｈａｎｇｈａｉＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ；ｐｌａｎｔｔｏｔａｌＲＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｋｉｔｗａｓｐｕｒｃｈａｓｅｄｆｒｏｍＴｉａｎｇｅｎｇＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏｍｐａｎｙ；ＡＭＶｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎ

，ＴＮＡｌｉｇａｓｅ，ａｎｄＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｋｉｔｓｃｒｉｐｔａｓｅ４Ｄ

ｗｅｒｅｐｕｒｃｈａｓｅｄｆｒｏｍＰｒｏｍｅｇａＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ．ＲｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｓｗｅｒｅｐｕｒｃｈａｓｅｄｆｒｏｍＳｈａｎｇｈａｉＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ．ＴｏｍａｔｏｃｕｃｕｍｂｅｒｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓｉｓｏｌａｔｅｓＮＳ０４ｗａｓｓａｖｅｄｂｙＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｒｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＳｈｉｈｅｚｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ／ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＳｈｉｈｅｚｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｏｔａｌＲＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｔｏｂａｃｃｏｐｌａｎｔｓ　ＴｏｔａｌＲＮＡｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｏｒｍＮｉｃｏｔｉａｎａｇｌｕｔｉｎｏｓａｗｈｉｃｈｈａｄｓａｖｅｄｔｏｍａｔｏＮＳ０４ｉｓｏｌａｔｅｓ，ａｎｄｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｗａｓｉｎａｃｃｏｒｄａｎｃｅｗｉｔｈＲＮＡｓｉｍｐｌｅＴｏｔａｌＲＮＡＫｉｔｍａｎｕａｌｏｐｅｒａｔｉｏｎｆｒｏｍＴｉａｎｇｅｎｇＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏｍｐａｎｙ．Ｐｒｉｍｅｒｓｄｅｓｉｇｎａｎｄｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ＢａｓｅｄｏｎｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｉｎＧｅｎｂａｎｋ，ｔｈｅＶｅｃｔｏｒＮＴＩｗａｓｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｐｒｉｍｅｒｓｄｅｓｉｇｎａｎｄｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ａｎｄｔｈｅｐｒｉｍｅｒｓｕｓｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙｗｅｒｅｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｂｙＳｈａｎｇｈａｉＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ．

Ｔａｂｌｅ１　ＰｒｉｍｅｒａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅｆｏｒＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎＰｒｉｍｅｒｎａｍｅＰｒｉｍｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅＣＭＶ２ＳＰ１ＣＭＶ２ＡＳＰ２ＣＭＶ２ＳＰ３ＣＭＶ２ＡＳＰ４ＣＲ２ＢｇＣＲ２ＫｐＣＲ２ＳＢ

ＧＴＴＴＡＴＴＴＡＣＡＡＧＡＧＣＧＴＡＣＧＧＴＴＣＡＡＴＣＴＣＧＡＡＧＧＣＡＴＣＴＣＴＧＧＡＡＧＴＡＴＡＡＣＣＴＣＣＣＡＧＴＴＣＴＣＡＣＣ

ＧＧＡＴＧＧＡＣＡＡＣＣＣＧＴＴＣＡＣＣ

ＧＧＡＧＡＴＣＴＧＴＴＴＧＣＴＣＡＣＴＴＣＡＴＧ　　ＢｇｌＩＩＧＧＧＴＡＣＣＧＡＡＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＴＴ　　ＫｐｎＩＧＧＧＡＧＣＴＣＧＧＡＴＣＣＣＧＴＴＣＡＣＣＧＴＧＡＡＡＡＣＧＴ

ＲＮＡ２ｇｅｎｏｍｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆ

ＣＭＶ　ＴｈｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｔｏｔａｌＲＮＡｗａｓｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎ