细胞凝集反应(2)

细胞生物学实验报告

盐水）参与下，由于例子的作用，中和了抗原抗体复合物外面的大部分电荷，使之是去了彼此间的经典排斥力，分子间相互吸引，凝集成大的絮片或颗粒。出现了肉眼可见的凝集反应。 但是，直接凝集反应技术也有缺点：特异性不高、抗原抗体无法获得或无法用于实验。

二、间接凝集反应技术

可溶性抗原（或抗体）吸附于免疫学反应无关的颗粒（称为载体）表面上，当这些致敏的颗粒与相应的抗体（或抗原）相遇时，就会产生特异性的结合，在电解质参与下，这些颗粒就会发生凝集现象。这种借助于载体的抗原抗体凝集现象就叫做间接凝集反应。载体的存在使反应的敏感性得以大大提高。

间接凝集反应的优点：

（1）敏感性强：间接凝集反应是最敏感型的血清学反应方法之一，可以检测到微量的抗体和抗原；

（2）快速：一般1h-2h即可判定结果，若在玻板上进行，则只需几分钟；

（3）特异性强；

（4）使用方便、简单

三、载体

具有吸附抗原（或抗体）的载体很多，如聚苯乙烯乳胶、白陶土、活性炭、人和多种动物的红血球、某些细菌等。

良好的载体有以下几点基本要求：

（1）在生理盐水或缓冲液无自凝倾向；

（2）大小均匀；

（3）比重与介质相似，短时间内不能沉淀；

（4）无化学或血清学活性

（5）吸附抗原（或抗体）后，不影响其活性。

目前应用最广的是人的O型红血球和绵羊红血球。而后者应用更广，因为其来源方便。另外绵羊红血球的表面有大量的（约1000个以上）糖蛋白受体，极易吸附某些抗原物质，吸附性能好，且大小均匀一致。

【实验用品】

1.材料

土豆块茎、家兔

2.试剂

抗凝血剂、PBS、土豆块茎、生理盐水和其他等渗液。

3．器材

5mL注射器、酒精棉球、双凹片、载玻片、普通光学显微镜、托盘天平、滴管、离心管。

【操作步骤】

1.取土豆去皮块茎2克，切碎并加10mlPBS缓冲液，浸泡24小时，浸出的粗体液中即含有可溶性土豆凝集素；

2.用针管抽取一定体积的抗凝剂（1%肝素溶液），并使抗凝剂充分浸润针管各部以及针头。然后从兔子耳根处或心脏抽取兔子静脉血1ml，加生理盐水3min，在1000r/min条件下，离心5分钟。重复三次离心，最后按沉淀的红细胞体积用生理盐水配成1%的红细胞悬液；

3.在双凹片的左孔滴加一滴PBS缓冲液，同时在双凹片的右孔处滴加一滴土豆凝集素；

4.在双凹片的左右孔同时滴加一滴1%的红细胞悬液，然后使左右孔内的液体都充分混匀；

5.左手捏住双凹片的一端，右手轻轻摇晃双凹片，使凹槽内的液体充分的混合，如此摇晃，观察结果