科研界的新宠-crisprcas9(7)

时间:2025-02-28

虽然普通质粒很多时候也能达到实验效果,但是质粒转染具有效率低,作用时间短暂性等缺点。病毒的出现解决了质粒这些问题,常用的病毒主要有慢病毒和腺病毒,慢病毒常用质粒见 addgene(lentiCRISPR v2,lentiGuide-Puro,lentiCas9-Blast),慢病毒可以整合入宿主基因组中,长期稳定的表达(汉恒生物提供 CRISPR/cas9 慢病毒包装),但是由于慢病毒克隆能力有限而 CAS9 本身

分子量比较大(大于 4kb),且长期插入可能导致乱切,脱靶等,同时慢病毒包装最终获得的滴度不高等原因,腺病毒更有优势,腺病毒克隆能力强,获得的病毒滴度也高。同时相对于普通质粒来说,作用是时间也比较长,可以达到更理想的敲除效果。

技术优缺点:

CRISPR ()是细菌用来抵御病毒侵袭/躲避哺乳动物免疫反应的基因系统。RNA引导Cas9核酸酶可在多种细胞(包括iPS) Rudolf Jaenisch 研究组将Cas9与Te1和sgRNA。 他们将Cas9/sgRNA 与带ES细胞ZFN/TALEN相比,CRISPR/Cas更易于操作,而且可以在不同的位点同时引

由于技术稳定成熟,可以对小鼠和大鼠的基因组序列进行各种饰,仍将是模式动物的构建的主要技术。 核酸酶ZFN/TALEN 尤其是CRISPR/Cas技术如果能解决脱靶效应的话,有可能会广泛应用于小鼠,大鼠及其他模式动物的制备和研究中,成为传统的转基因和基因打靶技术的重要补充。

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