基因敲除的实验过程

1、在把基因序列中寻找NGG序列获得其附近20多个碱基的序列，与tracrRNA序列融合，设计出sgRNA并合成该序列。

2、将该序列以及cas9基因连入如图所示载体。

3、转化感受态，质粒小提，测序验证。

4、细胞培养与细胞转染

5、敲除效果检测。

6、建立稳定敲除的细胞株

Cas9质粒构建