常用培养基的制备

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技能训练3 常用培养基的制备

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实训目标熟悉培养基制备的基本程序 会制备常用的培养基

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仪器材料高压蒸气灭菌器、电热干燥箱、电炉、天平、 量筒、漏斗、试管、培养皿、烧杯、三角烧瓶、 营养琼脂培养基(或伊红美兰琼脂培养基、三 糖铁琼脂培养基、SS琼脂培养基、麦康凯琼脂 培养基)等

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方法步骤

(一)营养琼脂培养基 (二)血液琼脂培养基 (三)肉汤培养基 (四)半固体培养基

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(一)营养琼脂培养基计算 称量 溶化 倒平板或倒试管 灭菌 无菌检验 备用

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1.计算：根据营养琼脂培养基的说明书了解营养琼脂粉与水的比 例，一般是1000 ml蒸馏水中应加营养琼脂粉31.3g,再根据 培养基的需要量确定营养琼脂粉的用量。 营养琼脂粉的量=31.3×15×n/1000 (g) 其中： 15代表一个平板需要营养琼脂约15 ml; n代表要做的培养基平板的数量

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2.称量：用普通天平准确称量出营养琼脂粉的量，用量筒量出相 应的 蒸馏水的量，要尽量准确。

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3.溶化：将营养琼脂粉和蒸馏水倒入搪瓷缸中，于电炉上加热溶 化，边加热边搅拌，沸腾时立即从电炉上拿下，等泡沫 消失后再放在电炉上加热，注意不能让琼脂溢出，煮沸 2—3次。

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4.倒平板或倒试管分装：若做平板培养基应倒于培养皿中，每板约15ml左右， 以刚好覆盖平皿底为易。 若做斜面培养基应倒入试管中，量为试管的1/3

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5.灭菌：用高压灭菌器灭菌将平板培养基整齐地平放入 高压灭菌器的内筒中，将试 管口盖上棉塞或橡胶塞，用 纸包扎好，直立放入内筒中， 在121.3℃灭菌20-30min。 灭菌完毕后，将平板培养基 拿出平放于桌面，凝固前勿 动；将试管培养基摆成斜面， 凝固前勿动。

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6.无菌检验：

随机抽取几个平板或试管培养基于温箱中培养24小 时，若无菌 生长则为合格。

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7.备用：中 保 存 备 用 。 冰 箱 ， 在 基 和 0 试 4 管 养 培 板 入 平 放 的 基 格 养 合 培 将

℃

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(二)血液琼脂培养基将灭菌的营养琼脂冷至45~50℃,以无菌操 作，加入5%~10%的无菌血液(或脱纤维 血),然后倾注平皿或分装试管制成斜面。

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(三)肉汤培养基1.成分 牛肉膏3~5g,蛋白胨10g,氯化钠5g,蒸馏水 1000ml。 2.制法 将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠加蒸馏水后，加热 溶解。矫正pH至7.4~7.6,过滤分装。置高压蒸气灭 菌器内，121.3℃灭菌20min即成。 3.用途 可供一般细菌生长，同时也是制作一般培养基 的基础原料。供营养要求较高的细菌分离培养，亦可 供溶血性的观察和保存菌种。

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(四)半固体培养基

肉汤培养基中加入0.3%~0.5%琼脂粉制成， 用于菌种的保存或观察细菌的运动性。

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课后作

业1.写出实习报告； 2.掌握普通营养琼脂培养基的制备过程