中国科学院2001~2007年生物化学与分子生物学(20)

终结版生化与分子

1.什么是反义RNA？真核生物中反义RNA调节基因表达的机理是什么？

2.简述原核生物与真核生物mRNA的主要差别。

3.设计PCR引物的主要原则是什么？

4.以雌二醇为例，简述类固醇激素发挥作用的主要机制。

5.核酸的紫外吸收有何特点？实验中如何利用这一特点研究核酸？

6.线粒体在真核生物的电子传递和氧化磷酸化中的作用是什么？

五、问答题 (每题10分，共50分)

1.真核生物蛋白质的翻译后加工有哪些？

2.酶的分离纯化主要过程及注意事项是什么？

3.大肠杆菌乳糖操纵子的主要结构和阻遏蛋白的作用机制是什么？

4.请列举出5种真核生物中存在的RNA 并概括它们的功能。

5.假设你需要将一段cDNA克隆到表达载体中并转化到大肠杆菌中。cDNA的两端和载体上均有BamHI的酶切位点，你需要用BamHI切割cDNA和载体然后将它们连接在一起。下面是实验方法要求的具体步骤： a.用BamHI处理载体DNA，然后用碱性磷酸酶去除5′ 端的磷酸基；

b.用BamHI处理cDNA, 然后与步骤a中得到的载体DNA混合，加入DNA聚合酶，在适当的条件下使cDNA与载体连接；

c.将步骤b 的产物转入大肠杆菌感受态细胞中，培养后均匀涂在含有抗生素的琼脂培养皿上。因为表达载体中含有抗性基因，能表达抵制抗生素的酶，所以只有含有载体的大肠杆菌才可以在含有抗生素的培养皿上生长，而未被转化的细菌则因受到抗生素的抑制而死掉。

你还参照实验手册做了下面四组对照：

对照一、在含有抗生素的培养皿上面涂布未被转化的（即不含有载体的）大肠杆菌感受态细胞 （cells alone）。 对照二、用未被酶切的载体直接转化大肠杆菌感受态细胞，将产物涂布在含有抗生素的培养皿上面（vector alone）。

对照三、用BamHI酶切载体DNA后，不用碱性磷酸酶处理，不需要cDNA，直接加入DNA聚合酶，然后转化、涂板 (Omit phosphatase, omit cDNA)。

对照四、除使用碱性磷酸酶外，其它与对照三相同 (Omit cDNA)。

你一共做了三次实验，在第一次中所有的平板中都长出很多细菌。在第二次实验中所有的平板中都没有长细菌。在第三次实验中你得到了较好的结果，转化成功，具体克隆数见下表：

No. of Colonies

Preparation of Sample 1 2 3

Control 1 Cells alone TMTC 0 0

Control 2 Uncut vector TMTC 0 >1000

Control 3 Omit phosphatase, omit cDNA TMTC 0 435

Control 4 Omit cDNA TMTC 0 25

Experimental sample TMTC 0 34

TMTC = too many to count

请回答下列问题：

A.解释第一次实验失败的原因，并说明对照一的目的是什么；

B.解释第二次实验失败的原因，并说明对照二的目的是什么；

C.对照三和对照四的目的是什么？为什么实验手册上建议用碱性磷酸酶处理载体？