人神经生长因子β基因转染对神经病理性痛大鼠脊(2)

麻醉

１３０

ｓｉｇｎｉｔｌｅａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｈｅｂｅｈａｖｉｏｒＰＷＬ

ｔｏ

８Ｃ０１＂ｅ

ａｎｄＰＷＬ

ｔｏ

ｍｅｃｈａｎｉｃａｌｓｔｉｍｕｌｕｓｂｅｔｗｅｅｎｇｒｏｕｐ

ｇｒｏｕｐ

ＩＩａｎｄ１１１ｗｈｉｌｅｔｈｅ

ｃｏｎｔｅｎｔ

ｒａｄｉａｎｔｈｅａｔｗ船ｓｉ四【ｌｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎ

ｇｒｏｕｐ

ｇｌ，ｏｕｐⅢｔｈａｎｉｎ

１Ｉ．ＡｆｔｅｒｏｐｅｒａｔｉｏｎＳＰａｎｄＣＧＲＰ

ｗｅ陀ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎｇｒｏｕｐ

ｌＩａｎｄｇｒｏｕｐＩＩＩｔｈａｎｉｎ

ｇｒｏｕｐ

ｉ．ａｎｄｓｉｇｎｉｔｉｃａｎｇｌｙｌｏｗｅｒｉｎｇｒｏｕｐＩＩＩｔｈａｎｉｎ

ｌＩ

７－２８ｄａｙｓａｆｔｅｒｏｐｅｒａｔｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ

ｃｏｎｔｅｎｔ

Ｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ

Ａｄ．ｈｌ、ｌＧ即ｇｅｎｅ

ａ

ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ

ｃａｎ

ａｔｔｅｎｕａｔｅｈｅａｔ

ｈｙｐｅｒａｌｇｅｓｉａｂｙｒｅｄｕｃｉｎｇＳＰａｎｄＣＧＲＰ（３ＣＩ．

ｏｆｔｈｅｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎ

ｒａｔ

ｍｏｄｅｌｏｆｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃｐａｌ．ｉｎｄｕｃｅｄｂｙ

【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｎｅｒｖｅ铲ｏｗｔｈ

ｆａｃｔｏｒ；Ｉｎｊｅｅｔｉｏｍ，ｓｐｉｎａｌ；Ｔｒａｎｓｔ＇ｅｃｔｉｏｎ；ＮｅｕｒｏｐａｔｈｉｃｐＢｉｎ；Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ

Ｐ：

１２ａｌｃｉｔｏｎｉｎｇｅｎｅ－ｒｅｌａｔｅｄｐｅｐｔｉｄｅ

Ｐ物质（ｓＰ）和降钙素基因相关肽（ｃｃｉｔｔ，）是与伤害性信息传导密切相关的神经活性物质，在脊髓痛觉信息传递过程中发挥着重要作用¨’２Ｊ。研究表明，重组腺病毒介导人神经生长因子Ｂ（Ａｄ．ｈＮＧＦＢ）基因脊髓转染后，可持续、高效表达，且能减轻神经病理性痛大鼠的热痛觉过敏旧 。本实验拟研究Ａｄ．ｈＮＧ即基因转染对神经病理性痛大鼠脊髓背角ＣＧＲＰ和ＳＰ含量的影响，以探讨Ａｄ．ｈＮＧＦ口基因转染减轻热痛觉过敏的机制。

材料与方法

Ａｄ．ｈＮＧＦＢ基因（２．２４

ｘ

１０１２

ＯＰＵ，本课题组构

建¨１）；３７３００辐射光热测痛仪和３７４００机械测痛仪

（ＵｇｏＢａｓｉｌｅＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ

Ａｐｐａｒａｔｕｓ公司，意大

利）；ＣＧＲＰ抗体及ＳＰ抗体（Ｓｅｒｏｔｅｃｈ公司，英国）；ＳＰ免疫组织化学山羊抗兔试剂盒（北京中杉公司）。

．

动物选择及分组健康雄性ＳＤ大鼠４８只，由

华中科技大学同济医学院实验动物中心提供，体重

２００。２５０

ｇ，随机分为３组（ｎ＝１６），假手术组（Ｉ组）

假手术后立即鞘内注射人工脑脊液（ＡＣＳＦ）２０ｍ；Ⅱ组和Ⅲ组制备坐骨神经慢性压迫性损伤（ＣＣＩ）模型，术后分别立即鞘内注射人工脑脊液或Ａｄ—ｈＮＧＦＢ基因１．１２×１０１１０ＰＵ（２０止）。每组分别于转染后４、７、１４及２８ｄ处死４只大鼠，取脊髓组织，免疫组织化学法测定ＣＧＲＰ和ＳＰ含量。

ＣＣＩ模型的制备

参照Ｂｅｎｎｅｔ等ｂ１介绍的方

法，腹腔注射１０％水合氯醛３００—３５０ｍｅ，／ｋｇ麻醉下，右后肢背侧纵向切口，游离坐骨神经，用４条５－０铬制羊肠线分别相距约１—２ｍｉｌｌ作松结扎，直到神经外膜稍受压为止，术后腹腔注射青霉素４００

０００Ｕ，

凡出现切口感染、后肢瘫痪及未产生慢性神经痛的动物均弃之；Ｉ组除不结扎坐骨神经外，其他操作同Ⅱ组和Ⅲ组。

转染方法参照王怀泉等［６１介绍的方法并略作改良，ＣＣＩ术或假手术后立即将大鼠俯卧位固定于手术板上，在腹部下垫一块１０

ｃｍ

ｘ４ｃ面×３

１３１１１厚的

泡沫板，以ｋ．。椎间隙为穿刺点，用２５一微量进样器与脊柱上方约成６００一７００进针，鼠尾突然出现侧摆表示鞘内穿刺成功。Ⅱ组和Ⅲ组ＣＣＩ术后分别立即鞘内注射人工脑脊液或Ａｄ．ｈＮＧ即１．１２×１０”ＯＰＵ（２０出），Ｉ组假手术后立即鞘内注射ＡＣＳＦ２０

ｐｌ，时

间约５ｓ，稍停２ｓ后拔针。

于术前ｌｄ（基础状态）、转染后２８ｄ内每４天测定热痛阈和机械痛阈（结果以手术侧与非手术侧比值表示）ｎ’８１及行为学评分。（１）行为学评分的测定参照文献［９］中介绍的方法，通过观察动物行为及损伤侧爪部姿势判断自发性痛程度，程度分为６级，

无任何行为异常为０分；爪部轻度屈曲为１分；爪部屈曲明显并外翻为２分；动物侧卧、爪部以内侧缘与玻璃板接触但不承重为３分；动物抬足、不与玻璃板接触为４分；除抬足外、还有舔足咬趾表现为５分。（２）机械痛阈的测定设定最大力度４０ｇ，达峰时间

１０

ｓ。大鼠置于机械测痛仪的铁丝网架上，用有机

玻璃观察框（２０

ｃｍ

Ｘ< …… 此处隐藏：336字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……