胶回收试剂盒说明书(生工)(3)

试剂准备

1. 自备材料：水浴锅、小型高速离心机（最大离心力 ≥ 12,000 × g）、1.5 ml离心管、无水乙醇、异丙醇等。

2. 按瓶身标签说明在Wash Solution中加入相应量的无水乙醇（乙醇终浓度为80%），混匀后在瓶身做好标记。密封于室

温保存。

3. Buffer B2在低温下可能产生沉淀，使用前请检查，如有沉淀，请于37°C溶解沉淀，待冷却至室温后使用。

4. 提前将水浴锅调至55°C备用。

标准回收步骤

1. 通过琼脂糖凝胶电泳尽可能将目的DNA片段与其它片段分开，用干净的手术刀片将含目的DNA片段的琼脂糖凝胶块切

下，放入1.5 ml离心管中，称重。

尽可能多地去掉不含目标DNA的琼脂糖。 每管琼脂糖凝胶块不要超过400 mg，否则导致溶胶不完全。 切胶过程尽可能快，减少DNA在紫外线中的暴露时间以降低对DNA的损伤。

B2。

凝胶浓度 ≤ 1%，每100 mg凝胶加入300 µl Buffer B2； 凝胶浓度 >1%，≤1.5%，每100 mg凝胶加入400 µl Buffer B2； 凝胶浓度 >1.5%，≤2%，每100 mg凝胶加入500 µl Buffer B2； 凝胶浓度 >2% ，每100 mg凝胶加入600 µl Buffer B2。 胶块完全溶化即可，过长时间的处理可能导致DNA损伤。

步骤可以省略，直接进行步骤5。

5. 将溶化好的溶液全部移入吸附柱，8,000 × g离心30 sec。倒掉收集管中的液体，将吸附柱放入同一个收集管中。 如果溶胶液总体积大于750 µl，则每次使用750 µl，多次上柱。 2. 根据胶块的重量和浓度，按每100 mg琼脂糖（如胶块不足100 mg则用水补充至100 mg）加300~600 µl的比例加入Buffer 3. 将离心管置于50°C水浴5~10 min，间或混匀，直至胶块完全溶化。 4. （可选步骤）当目的片段 < 500 bp时，加入所使用的Buffer B2体积1/3的异丙醇，混匀。当目的片段 ≥ 500 bp时，此

6. 向吸附柱中加入500 μl Wash Solution，9,000 × g离心30 sec。倒掉收集管中的液体，将吸附柱放入同一个收集管中。 Wash Solution首次使用前请检查是否已加入正确量的无水乙醇。

7. 重复步骤6一次。

8. 将空吸附柱和收集管放入离心机，9,000 × g离心1 min。

此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。

保存或用于后续试验。

Elution Buffer为2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5，可以用TE或水（pH > 7.0）代替。

将Elution Buffer预热至60°C可以进一步提高得率。 如果片段 > 4 kb，在37~60°C温浴2分钟可以显著提高得率。 请勿使用小于15 μl的洗脱液进行洗脱。 9. 在吸附膜中央加入15~40 μl Elution Buffer，室温静置1~2 min，9,000 × g离心1 min。将所得到的DNA溶液置于-20°C

常见问题解答

1. DNA回收效率较低或者未回收到目的片段