变性。

(4) 电渗作用: 如纸上电泳蛋白质移动的方向与电渗现象相反，则实际上蛋白质泳动的距离，等于电泳移动距离减去电渗距离。如电泳方向和电渗方向一致，其蛋白质移动距离，等于二者相加。电渗现象所造成的移动距离可用不带电的有色染料或有色葡聚糖点在支持物的中间，观察电渗方向和距离。

10. 区带电泳分几类？

2．按支持物的装置形式不同，可分为：①平板式电泳；②垂直板式电泳；③垂直管状电泳。

3．按pH值的连续性不同，可分为：①连续pH电泳：电泳的全部过程中缓冲液pH值保持不变；②不连续pH电泳：缓冲液与支持物之间有不同的pH值，能使分离物质的区带更加清晰。不连续与连续电泳的主要区别在于前者有两层不同孔径的凝胶系统；电极槽中及两层凝胶中所用的缓冲液pH值不同；电泳过程中形成的电位梯度亦不均匀。而后者在这三个方面都是单一或是均匀的。

11. 离心技术基本原理是什么？

低速 6000r/min 高速 25000r/min 超速

答：离心基本原理是根据物质沉降系数、质量、浮力因子等不同，利用离心机产生强大离心力来分离具有不同沉降系数的物质。沉降系数是微颗粒在离心力场的作用下，从静止状态到到达极限速度所需要的时间。其单位用S表示，1S = 1×10 -13秒。它反映的是单位离心力做用下颗粒沉降的速度。

12．常用的离心分离方法有哪些？原理是什么？

答：1．差速离心法：不同的离心速度，由低速到高速分阶段离心，将不同颗粒大小的微粒分批沉降析出，留取所需成分。

2．密度梯度离心法：样品溶液在密度梯度介质中进行离心沉降，在一定的离心力作用下把各组分的颗粒分配到梯度液中相应位置上，形成不同区带的分离方法。

3．超速离心法：超速离心法多用于亚细胞结构的分离制备和生物大分子的制备。目前转速已达85000r／min以上。生物大分子在超离心力场作用下，离心力大于分子扩散力，生物大分子便逐渐沉降。分子量和分子形状不同，其沉降的速度就不同，因此而被分离。离心分离是利用离心力将悬浮液中的悬浮微粒快速沉降，借以分离比重不同的各种物质成分的方法，是实验室分离提取生物分子常规采用的技术之一。

17. 细胞培养必需设备有哪些？

答：细胞培养必需设备有超净工作台、CO2培养箱、倒置显微镜、液氮生物容器、压力蒸汽消毒器、无菌过滤器、电热干燥箱、离心机、细胞计数板和冰箱等。

18. 无菌操作技术包括哪些内容?

答：1. 保持安静、整洁的无菌工作区域; 2. 保持干净整洁的工作面; 3. 注意个人卫生；4. 在洁净工作台内无菌操作

实验一 贴壁细胞的传代培养

1.何谓贴壁细胞？

答：贴壁细胞又称锚着依赖性细胞，是指赖于贴附在培养器皿表面生长的细胞，大多数培养细胞属于此类。细胞附着或贴附于底物表面上，呈现出极性细胞的典型形态过程，称为贴壁。贴壁是贴附类细胞生长增殖的条件之一。

2. 贴壁细胞的传代培养的实验原理是什么？

答：细胞的贴壁是通过特异的细胞表面受体与细胞外基质分子结合而实现的，细胞在铺展之前，细胞已分泌了细胞外基质和蛋白聚糖。细胞外基质先粘着在带电荷的培养基质上，然后，细胞再通过特异的受体附着到基质上。蛋白酶可消化细胞外基质，甚至通过降解跨膜蛋白的胞外区使单层培养的贴壁细胞彼此分离。上皮细胞一般不易解离，因为它们通过紧密连