小鼠Runt相关转录因子2 (RUNX2)-ELISA试剂盒说明书

时间：2025-05-15

小鼠Runt相关转录因子2 (RUNX2)酶联免疫吸附测定试剂盒

使用说明书

产品编号：E-EL-M1030

（本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!）

声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。本产品选用世界著名生产厂家的原料，采用专业ELISA kit生产技术制造。适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组RUNX2浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。

*: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整）

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠RUNX2抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的RUNX2会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠RUNX2抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠RUNX2抗体与结合在包被抗体上的小鼠RUNX2结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值，RUNX2浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中RUNX2的浓度。

标本收集:

1. 血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集

血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。

2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA.Na2，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可

检测。避免使用溶血，高血脂标本。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞

会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g 离心5~10分钟，取上清检测。

4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。

5. 其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测

（具体处理方法可参考：http://www.77cn.com.cn/news2.asp?tid=477 ）

6. 标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7. 标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃冰箱内，避免反复冻融，

1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。

8. 如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做

预实验，以确定稀释倍数)。

试验所需自备物品:

1. 酶标仪(450nm波长滤光片)

2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL

3. 37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水

4. 吸水纸

检测前准备工作:

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结

晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。

3. 标准品: 加入标准品&样品稀释液10分钟，待其充分溶解后，

轻轻混匀(浓度为20ng/mL)。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度： 20、10、5、2.5、1.25、0.63、0.31、0 ng/mL ，样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制10ng/mL标准品：取0.5mL 20ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。

4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配

制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。

5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制

100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物成工作浓度。当日使用。

标准品稀释方法图例：(以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管)

10 5 2.5 1.25 0.63 0.31 0 ng/mL

洗涤方法:

1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。

2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸

去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。

操作步骤:

实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。