课题计划项目以及可行性研究报告

课题题目为：琼脂糖自组装膜基底型免疫芯片载体制备及抗体固定研究项目容摘要：

项目概况

1、主要研究开发容

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3、技术创新点

4、获得成果和知识产权（此处需要作者自己填写）

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以下为项目可行性研究报告（一）目的意义（限1000字）

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（二）国外同类产品和技术情况（限500字）

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后易溶于水，不同浓度的琼脂糖在玻片上形成的膜的厚度和孔径大小也有差异，膜的厚度和孔径的大小会直接影响蛋白质的固定。

参考文献

[1]Sjberg Ｒ，Mattsson C，Andersson E，et al．Exploration of high-den- sity protein microarrays for antibody validation and autoimmunity profiling ［J］．New Biotechnol，2016，33(5): 582-592.

[2]Thk SM，Bonabi A，Nordberg ME，et al．Thiol-ene microfluidic devices for microchip electrophoresis: Effects of curing conditions and monomer composition on surface properties［J］．J Chromatog-raphy A，2015，1426: 233-240.

[3]Klimushina MV，Gumanova NG，Metelskaya VA. Direct labeling of

serum proteins by fluorescent dye for antibody microarray［J］．Bio-

chem Biophy Ｒes Commun，2017，486(3): 824-826.

[4]Chang SY，Bong JH，Yoo G，et al．Activity control of autodisplayed proteins on the same outer membrane layer of E. coli by using Z-domain streptavidin and lipase foldase systems［J］．Enzyme Mi-crobial Technology，2017，96:85-95.

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（三）市场预测和发展趋势（限500字）

二、研究开发容、方法、技术路线

（一）具体研究开发容和要重点解决的技术关键问题（限1000字）

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真空扫描电镜，FTS3000FX 型的傅立叶变换红外光谱仪，OLYMPUS BX51 型倒置荧光显微镜，Nanoscope IIIa 型原子力显微镜。

基片的预处理：25 mm×75 mm光学载玻片用氨水洗液(体积比为氨水∶过氧化氢∶水= 1∶1∶5) 置摇床上振摇 2 h，取出后用超纯水清洗干净，放入1mol /L HCl中浸泡过夜，再用超纯水超声10 min，无水乙醇超声清洗2次，每次5 min，置电热恒温箱(120℃ )烘烤2 h。

琼脂糖自组装膜载体制备①分别配制0. 6%、0. 8%、1. 0%、1. 2%、1. 4%的琼脂糖溶液，微波炉煮沸 3 min 完全溶解; ②将 2 ml 琼脂糖溶液覆盖在60℃预热的清洁玻片上; 琼脂糖室温凝固后，置37℃烤箱烘干2 h; 置室温保存备用; ③将上述制备好的琼脂糖玻片置于50 mmol /L NaIO4 溶液中室温下活化60 min。接着用0. 1 mol /L pH7. 4 PBS 洗涤5 min×3次，氮气流吹干。

普通醛基载体制备：按照文献中的方法制备普通醛基载体。清洗好的玻片浸入APTES活化试剂( 丙酮稀释) 中20 min 后取出，玻片用丙酮、去离子水冲洗，120℃下烘干，然后放入含5%戊二醛溶液中室温下浸泡2 h，取出用去离子水冲洗5 min×3次，烘干后，至干燥处保存。

基片表面抗体探针的固定：探针为FITC标记的驴抗兔IgG和兔抗人AFP 抗体，将探针固定至修饰后的载体表面，研究载体对不同蛋白探针的固定效率。取原始浓度为1mg /ml的探针溶于含20%甘油的PBS 溶液中稀释，使探针终浓度分别为0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5、0. 6 mg /ml，将探针分子分别到修饰后基片上，避光，置于湿盒中，37℃固定3 h，然后PBS清洗3次，洗掉未结合的荧光探针，晾干后荧光显微镜检测，获取荧光图像。

不同基片对抗体分子固定效率的比较：利用最佳条件分别制备普通醛基化载Word资料