现代药理学研究方法(9)
发布时间:2021-06-06
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对增殖细胞的杀伤力=No-No`×100%No
计算药物对增殖细胞的杀伤力(No`是对照组的的截距)
2)用Nt代表接种后t小时的细胞数, 用公式
TD = 0.301t / logNt - LogNo
计算药物对细胞增增时间(TD)的影响。
3)取平台期每毫升的细胞均数,比较细胞生长的饱合密度(Ns)。
4、集落形成法 本方法利用分裂≥6代以上的克隆原单细胞子细胞可形成集落成簇(每簇细胞数>50)的能力,比较药物对单个肿瘤细胞增殖能力的影响。本方法有贴壁法和半固体培养法两种。
1)贴壁法 需要选用贴壁生长的细胞, 按500细胞/ml的浓度接种到35mm培养皿中,培养后弃去培养基,用瑞氏-姬姆萨染色后,在20×解剖显微镜下计数含有50个细胞的细胞集落。
2)半固体软琼脂培养法 取对数生长的细胞,用含小牛血清的培养液稀释成1000细胞/ml的悬液;溶化5%的琼脂液,并按1:9的比例与含小牛血清的新鲜培养液混合,倒入35mm培养皿(1ml/皿),室温下待琼脂凝固,取0.94ml的细胞悬液,加0.04ml的5%琼脂, 加到已制备的琼脂平皿中,室温下凝固。移入培养箱培养。在16×解剖显微镜下计数直径大于75μm的细胞集落。以集落形成抑制百分率对对数剂量作图,可得“S”型曲线,从曲线上求取半数抑制浓度IC50;以集落的存活分数与剂量作图,可获得克隆原细胞存活曲线,方程为S=1-(1-e-D/Do)n,S为存活分数, D 为剂量, Do为存活分数每下降1/ e时所需的药物剂量, n为外推值。Do越小, 药物的杀伤力越大,N越大杀死细胞的药物剂量越大。
5、硫化若丹明B法(SRB)法 硫化若丹明(sulforhamine B)呈粉红色,溶于水,可与生物大分子的碱性氨基酸结合,这种结合物在波长515nm时的读数与细胞表现出良好的线性关系,可用于细胞的定量。测试的细胞先用TCA固定,去除固定液,加入SRB, 室温下静置, 然后去除未结合的SRB, 用非缓冲tris碱液溶解结合的SRB,在自动化分光光度平板读数仪(515nm波长)测定OD值。可根据下述公式计算:
T - T0
生长率(%)= ×100%
C - T0
C、T和To分别为对照组细胞,为给药组细胞,另外的对照平板加药时的细胞的OD值。
T - T0
杀伤率(%) = ×100%
T
T - T0
50%生长抑制所需的药物浓度(GI50) = ×100%
C - T0
T - T0
杀死50%细胞所需的药物浓度(LC50)= ×100%
T0
(二) 在体试验法
1、小鼠白血病L1210 系用甲基胆蒽诱发DBA/2小鼠而得。取接种于DBA/2小鼠第6~7天之腹水,