双抗体夹心ELISA法测定残余汉逊酵母菌体蛋白含量

双抗体夹心ELISA法测定残余汉逊酵母菌体蛋白含量的研究

四川动物２００８年第２７卷第５期

Ｓｉｃｈｕａｎ

ＪｏｕｒｎａｌｏｆＺｏｏｌｏｇｙ

ＶｏＬ２７Ｎｏ．５２００８

双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法测定残余汉逊酵母茵体蛋白含量的研究

邵强，王俊华

（河南师范大学生命科学学院，河南新乡４５３００７）

摘要：目的通过免疫白兔和小鼠获得抗汉逊酵母菌体全蛋白血清，建立测定残余宿主汉逊酵母菌体蛋白含量

的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ的方法。方法由免疫动物得到抗血清，分别作为包被抗体和检测抗体，通过方阵滴定实验确定双抗体夹心ＥＬＩＳＡ最佳条件。结果获得的兔、小鼠抗血清经问接ＥＬＩＳＡ检测效价均达到１：１００００。作为包被抗体小鼠抗血清的最佳包被浓度为１０¨ｇ／ｍｌ，在３０～５００ｎｇ／ｍｌ范围内测定呈直线关系，相关系数为０．９９８５。可用于测定基因工程产品中汉逊酵母菌体蛋白的残余链。

关键词：酶联免疫吸附测定；菌体蛋白；汉逊酵母中图分类号：Ｑ９５－３３；Ｑ９３９．９１

文献标识码：Ａ

文章编号：１０００—７０８３（２００８）０５—０９４５—０２

ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＨａｎｓｅｎｕｌａｐｏｌｙｍｏｒｐｈａＰｒｏｔｅｉｎＲｅｍｎａｎｔｓｂｙＤｏｕｂｌｅＡｎｔｉｂｏｄｙ

ＳａｎｄｗｉｃｈＥＬＩＳＡ

ＳＨＡＯ

Ｑｉａｎｇ，ＷＡＮＧＪｕｎ—ｈｕａ

（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＨｅｎａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ，ＨｅｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ

４５３００７，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ

Ｔｈｅａｎｔｉｓｅｒｕｍ

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Ｂｙｃｒｏｓｓｉｎｇｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏａｔｉｎｇｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆａｎｔｉｂｏｄｙＷａＳ

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Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＥＬＩＳＡ；ｃｅｌｌｐｒｏｔｅｉｎ；Ｈａｎｓｅｎｕｌａｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ

随着现代生物技术的发展，越来越多的重组产品投放市场。等体积弗氏不完伞佐剂乳化含１ｍｇ蛋白），皮下多点注射，残余宿主菌体蛋白是影响制品安全性的主要因素之一，反复使加强２次。４周后每只按０．８ｍｌ（含０．５ｍｇ蛋白）菌体蛋白用含一定昔菌体蛋白的重组产品有可能引发机体过敏反应（冯原液耳缘静脉注射，再次加强免疫７ｄ后颈动脉放血，收集血彦玲，２００７）。目前，阁内以酵母为表达宿主重组产品中，大多采清，分装，于一２０℃保存（范薇等，２００５）。

用酿酒酵母作为宿主进行表达，对此的榆测，市场上已有检测试１．２．２酵母菌体全蛋白免疫小鼠取纯化的汉逊酵母全菌

剂盒。但对于用汉逊酵母作为宿主菌进行表达的重组产品中菌菌体蛋白溶液与氢氧化铝佐剂充分混合，免疫１００只ＮＩＨ小

体蛋白的检测目前还是宅白。为此，有必要通过免疫动物获得

鼠，每只腹腔注射０．５ｍｌ（含０．１ｍｇ蛋白），以后每隔１５、１０、

抗血清，建上．灵敏度高、重复性好的舣抗体夹心ＥＵＳＡ检测重组

１０

ｄ分别加强１次。７ｄ后鼠眼球放血，收集血清，混合后再

疫苗中汉逊酵母残余菌体蛋白含量。

分装，于一２０。Ｃ保存（范薇等，２００５）。

１材料与方法

１．２．３抗体效价测定按张飚（２００６）的方法，间接ＥＬＩ …… 此处隐藏：635字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……