实验三、霉菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别

实验三 酵母菌的形态观察及死、 酵母菌的形态观察及死、活细胞 的鉴别和霉菌的形态观察 的鉴别和霉菌的形态观察

实验三、霉菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别

一、目的与要求 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习鉴别酵 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式， 母菌死活细胞的方法。 母菌死活细胞的方法。 掌握酵母菌的形态特征及其与细菌的区别。 掌握酵母菌的形态特征及其与细菌的区别。 观察霉菌菌落形态特征。 观察霉菌菌落形态特征。 霉菌菌落形态特征 观察霉菌菌体的微观特征。 观察霉菌菌体的微观特征。 霉菌菌体的微观特征 学习描述菌落特征的方法。 学习描述菌落特征的方法。

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二、基本原理 基本原理1、酵母菌形态观察和死活细胞鉴别酵母菌是不运动的单细胞真核微生物， 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常 见细菌大几倍甚至十几倍。大多数酵母以芽殖 少数以裂殖 见细菌大几倍甚至十几倍。大多数酵母以芽殖、少数以裂殖进 芽殖、 裂殖进 行无性繁殖；有性繁殖则通过结合产生子囊孢子。 子囊孢子。 行无性繁殖；有性繁殖则通过结合产生子囊孢子 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型 氧化型呈蓝色， 无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时， 无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代 谢作用，细胞内具有较强的还原能力， 谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化 型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞 型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无 活细胞是 色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则分别呈蓝色和淡 死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则分别呈蓝色和 或代谢作用微弱的衰老细胞则分别呈蓝色 蓝色。 蓝色。

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二、基本原理 基本原理2、霉菌形态 霉菌可产生复杂的分枝菌丝， 霉菌可产生复杂的分枝菌丝 ， 其菌丝可分为基 内菌丝和气生菌丝， 内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化 产生繁殖菌丝， 由繁殖菌丝产生孢子。 产生繁殖菌丝 ， 由繁殖菌丝产生孢子 。 霉菌菌丝 尤其是子实体) (尤其是子实体)及孢子的形态特征是识别不同种 类霉菌重要依据。 类霉菌重要依据。 霉菌菌丝和孢子的宽度比细菌粗得多， 霉菌菌丝和孢子的宽度比细菌粗得多， 通常是 细菌菌体宽度的几倍到几十倍，因此， 细菌菌体宽度的几倍到几十倍，因此，有低倍显微 镜即可观察。 镜即可观察。

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三、实验器材1、菌种：酿酒酵母、青霉菌、曲霉菌、毛霉菌等 菌种：酿酒酵母

、青霉菌、曲霉菌、 2、染色剂： 0.1%吕氏碱性美蓝染色液，棉蓝染色 染色剂： 0.1%吕氏碱性美蓝染色液， 吕氏碱性美蓝染色液 液 3、仪器或其他用具：载玻片、生理盐水、酒精灯、 仪器或其他用具：载玻片、生理盐水、酒精灯、 接种环、解剖针、盖玻片、显微镜、擦镜纸、 接种环、解剖针、盖玻片、显微镜、擦镜纸、滤纸 等

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四、操作步骤1、酵母菌形态观察和死活细胞鉴别1)在载玻片上滴加0.1%吕氏碱性美蓝染色液 在载玻片上滴加0 酵母菌菌悬液，与染液混匀， 酵母菌菌悬液，与染液混匀，盖上盖玻片 放置3min后镜检 放置3min后镜检操作要点： 操作要点： 染液不宜过多或过少，否则影响观察。 染液不宜过多或过少，否则影响观察。 盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察。 盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察。 先用低倍镜找到适当视野，再换高倍镜观察。 先用低倍镜找到适当视野，再换高倍镜观察。

挑取少许 立刻镜检

放置10min后再次镜检 放置10min后再次镜检，观察颜色变化 后再次镜检，

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四、操作步骤1、霉菌及酵母菌菌落形态(1)大小：大、中、小。或用十字交叉法测量菌落直径。 大小： 或用十字交叉法测量菌落直径。 (2)形态：圆形、不规则形。 形态：圆形、不规则形。 (3)干湿：干燥、湿润、粘稠。 干湿：干燥、湿润、粘稠。 (4)高度：扁平、隆起、凹下。 高度：扁平、隆起、凹下。 (5)透明度：透明、半透明、不透明。 透明度：透明、半透明、不透明。 (6)颜色：白色、乳白色、黄色、金黄色、绿色、红色、褐 颜色：白色、乳白色、黄色、金黄色、绿色、红色、 色等。中间与边缘有无区别。 色等。中间与边缘有无区别。 (7)边缘：整齐、不整齐。 边缘：整齐、不整齐。

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四、操作步骤在载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液 子挑取少许菌丝， 子挑取少许菌丝，浸于染液中 散开 盖上盖玻片 用镊 用解剖针将菌丝分 用高倍

低倍镜观察

镜观察菌丝局部操作要点： 操作要点： 挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态。 挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态。 尽可能将菌丝分开，加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。 尽可能将菌丝分开，加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。 挑取菌丝前镊子和解剖针要在酒精灯上灼烧灭菌。 挑取菌丝前镊子和解剖针要在酒精灯上灼烧灭菌。

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五、实验数据及处理结果1、描述你所观察到的霉菌的主要形态特征。 描述你所观察到的霉菌的主要形态特征。 2、绘图说明你所观察到的酿酒酵母菌形

态特征，及 绘图说明你所观察到的酿酒酵母菌形态特征， 出芽方式。 出芽方式。 3绘图说明霉菌的形态特征。 绘图说明霉菌的形态特征。

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六、思考与讨论 六、思考与讨论1、你认为在显微镜下，细菌、放线菌、酵母菌和 你认为在显微镜下，细菌、放线菌、 霉菌的主要区别是什么？ 霉菌的主要区别是什么？

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芽细胞

酿酒酵母

假丝酵母

子囊

子囊孢子

裂殖

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毛霉

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根霉

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青霉

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曲霉